[發明專利]自斷蛋白的活性控制及其應用

在審

• 申請號: 201811192882.0
• 申請日: 2018-10-13
• 公開（公告）號: CN110655584A
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 李翊榮;蘇士哲
• 申請（專利權）人: 蘇士哲
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/00;C12N15/63
• 代理公司: 11308 北京元本知識產權代理事務所
• 代理人: 葉凡

1.一種自斷蛋白，包括一內含蛋白，其特征是，所述內含蛋白的N端第1個氨基酸有一突變，其中所述內含蛋白源自于NpuDnaE。

2.如權利要求1所述的自斷蛋白，其特征是，所述突變包括置換、刪除、插入及/或取代。

3.如權利要求1所述的自斷蛋白，其特征是，所述內含蛋白N端第1個氨基酸半胱氨酸(Cys)經由所述突變而改變N端序列，造成所述內含蛋白失去N-端自我斷裂活性。

4.如權利要求1所述的自斷蛋白，其特征是，所述自斷蛋白的序列系包括:SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。

5.一種融合蛋白，具有下式(I)結構：

(X)n-(I)-(P)m (I)

其中，

X為氨基酸序列、連接符、磁珠或其類似物；

I為權利要求1所述的自斷蛋白；

P為目標蛋白；

n為0以上的整數；以及

m為1以上的整數。

6.如權利要求5所述的融合蛋白，其特征是，所述X為一標簽序列，所述標簽序列包括任何供協助純化及表達的氨基酸序列。

7.如權利要求6所述的融合蛋白，其特征是，所述標簽序列包括但不限于His-Tag或GST-Tag。

8.如權利要求5所述的融合蛋白，其特征是，所述目標蛋白為多肽、蛋白質、重組蛋白、抗體、酵素或激素。

9.一種蛋白質表達載體，其特征是，所述蛋白質表達載體包含如權利要求1所述的自斷蛋白的核苷酸序列。

10.如權利要求9所述的蛋白質表達載體，其特征是，所述核苷酸序列包括:SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。

11.如權利要求9所述的蛋白質表達載體，其特征是，所述包括但不限于His-Tag或GST-Tag的核苷酸序列。

12.一種生產、純化蛋白質的方法，包括:

(a)在宿主中表達如權利要求5所述的融合蛋白；

(b)在抑制條件下收集、純化所述融合蛋白，其中所述抑制條件為pH值中性至酸性條件；

(c)將所述融合蛋白置于促進條件，使所述融合蛋白中的自斷蛋白斷裂，且目標蛋白與所述自斷蛋白分離，所述促進條件為pH堿性條件；以及

(d)收集、純化該目標蛋白。

13.如權利要求12所述的方法，其特征是，所述pH值中性至酸性條件為pH值4-7。

14.如權利要求12所述的方法，其特征是，所述抑制條件為高鹽度環境。

15.如權利要求14所述的方法，其特征是，所述高鹽度環境為鹽濃度300mM以上。

16.如權利要求12所述的方法，其特征是，所述抑制條件為溫度為25℃以下的環境。

17.如權利要求12所述的方法，其特征是，所述pH堿性條件為pH值7-11。

18.如權利要求12所述的方法，其特征是，所述促進條件為低鹽度環境。

19.如權利要求18所述的方法，其特征是，所述低鹽度環境為鹽濃度300mM以下。

20.如權利要求12所述的方法，其特征是，所述促進條件為溫度為25℃以上的環境。