[發明專利]一種檢測高通量抗生素殘留的方法及微生物顯色試劑盒

有效

• 申請號: 201811190620.0
• 申請日: 2018-10-12
• 公開（公告）號: CN109270056B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 范維;高曉月;李瑩瑩;王守偉;郭文萍;陳淑敏;宋永青;李賀楠;王琳;趙文濤;陳超;任楠
• 申請（專利權）人: 中國肉類食品綜合研究中心
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N1/30
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種檢測高通量抗生素殘留的方法，其特征在于，以大腸埃希氏菌為指示菌，檢測禽畜肉中抗生素殘留的微生物顯色法；

所述大腸埃希氏菌的菌種保藏編號為CICC23657；對喹諾酮類、氨基糖苷類、四環素類抗生素單獨及喹諾酮類和氨基糖苷類抗生素配伍使用時抗生素的殘留進行聯合初篩；

所述方法采用PVA-硼酸-四硼酸鈉的微膠囊包埋法對指示菌進行微膠囊化；所述微膠囊包埋法具體為：制備重量百分比為9%-11%聚乙烯醇的溴鉀酚紫葡萄糖蛋白胨培養基溶液，滅菌處理后，加入大腸埃希氏菌的菌懸液，再將其緩慢滴入pH值為6的硼酸-四硼酸鈉溶液中，然后于3~5℃靜置5~7h，過濾獲得的指示菌顆粒，洗凈備用。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，對所述禽畜肉預先進行提取，將禽畜肉進行均質處理后，加入pH6.5-8.0的磷酸鹽緩沖溶液進行充分混勻；然后置于90~110℃的溫度下水浴3~5min，高速離心取上清液；將所述微膠囊化的指示菌顆粒固定在微孔板中的微孔中，依次向每孔中加入檢測液，然后再分別加入對照組以及所述上清液；將所述微孔板置于36~45℃的溫度下進行培養，觀察顏色變化，判斷抗生素殘留情況。

3.一種檢測高通量抗生素殘留的微生物顯色試劑盒，其特征在于，包括微膠囊化的指示菌顆粒、檢測液、禽畜肉樣品提取液以及對照組；

其中，所述指示菌顆粒中的指示菌為大腸埃希氏菌；所述大腸埃希氏菌的菌種保藏編號為CICC23657；對喹諾酮類、氨基糖苷類、四環素類抗生素單獨及喹諾酮類和氨基糖苷類抗生素配伍使用時抗生素的殘留進行聯合初篩；

所述對照組包括陽性對照組、陰性對照組以及空白對照組；所述陽性對照組為抗生素標準溶液，所述陰性對照組為禽畜肉樣品提取液；

所述微膠囊化的指示菌顆粒采用如下方式獲得：

制備重量百分比為9%-11%聚乙烯醇的溴鉀酚紫葡萄糖蛋白胨培養基溶液，滅菌處理后，加入大腸埃希氏菌的菌懸液，再將其緩慢滴入pH值為6的硼酸-四硼酸鈉溶液中，然后于3~5℃靜置5~7h，過濾獲得的所述指示菌顆粒，洗凈備用。

4.根據權利要求3所述的微生物顯色試劑盒，其特征在于，所述檢測液按重量份計，包括8~12份蛋白胨、2~4份牛肉浸膏、8~12份葡萄糖、4~6份NaCl、0.03~0.05份溴甲酚紫指示劑、800~1200份水；所述檢測液的pH值為6.8-7.2；

所述禽畜肉樣品提取液具體為pH6.5-8.0的磷酸鹽緩沖溶液。

5.根據權利要求4所述的微生物顯色試劑盒，其特征在于，所述禽畜肉樣品提取液具體為pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液。

6.根據權利要求3所述的微生物顯色試劑盒，其特征在于，所述空白對照組為生理鹽水。

7.根據權利要求3所述的微生物顯色試劑盒，其特征在于，所述抗生素標準溶液中至少包括慶大霉素、鏈霉素、青霉素G、四環素、紅霉素、羅紅霉素、恩諾沙星、諾氟沙星、環丙沙星。

8.根據權利要求7所述的微生物顯色試劑盒，其特征在于，所述抗生素標準溶液的濃度為0.08~0.12ug/mL。

9.根據權利要求3所述的微生物顯色試劑盒，其特征在于，所述大腸埃希氏菌的菌懸液采用如下方式獲得：

將大腸埃希氏菌接種到液體培養基中，于35-37℃的條件下進行培養22-24h后；取0.1mL培養后的菌液于固體培養基上進行涂布優化傳代培養22-24h，連續傳2-3代進行活化；取活化后的菌體，進行洗滌后，再置于液體培養基中，即得指示菌菌懸液。

10.根據權利要求9所述的微生物顯色試劑盒，其特征在于，以所述液體培養基為空白，于波長為600nm的條件下，取吸光度值為0.8~1.2的指示菌菌懸液。