[發明專利]一種構建小白菜離體再生體系的方法

在審

• 申請號: 201811189960.1
• 申請日: 2018-10-12
• 公開（公告）號: CN109258466A
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 袁家錚;王春明;石麗;于為常
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 深圳市韋恩肯知識產權代理有限公司 44375
• 代理人: 李玉平

本發明公開了一種構建小白菜離體再生體系的方法，包括以下步驟：(1)對選定品種的小白菜種子進行預處理后培養；(2)切取步驟(1)的3～6天苗嶺的子葉，進行分化培養，確定不定芽誘導效率高的苗齡；(3)于步驟(2)確定的不定芽誘導效率高的苗齡期，切取步驟(1)的子葉，分別進行分化培養，確定不定芽誘導效率高的分化培養基；(4)切取步驟(1)的子葉，通過步驟(3)確定的分化培養基進行分化培養；(5)移入壯苗培養基進行培養；(6)移入生根培養基進行培養。本發明的構建方法，可篩選出再生能力強的品種和適配的培養基，取材容易，培養操作簡單，使構建的小白菜再生體系高效穩定，綜合性能優越，容易形成愈傷組織，不定芽誘導率高。

技術領域

本發明屬于作物培育領域，具體涉及一種構建小白菜離體再生體系的方法。

背景技術

小白菜(Brassica rapa L.ssp.chinensis)原產中南亞，別名青菜，與結球白菜(大白菜)為近親同屬于十字花科蕓薹屬，兩者皆為亞種。在我國南北兩地各有分布，是南方各省主要種植以及食用的蔬菜。十字花科蕓薹屬農作物種類繁多，芥菜、甘藍、白菜和菜心等多作為食用蔬菜，油菜則作為油料作物。因此蕓薹屬農作物在蔬菜中各方面都有著重要地位。

目前，農作物迫切需要具備抗逆、抗蟲害、抗除草劑及重金屬污染等優良性狀的新品種，因此對蕓薹屬的農作物進行遺傳改良研究的重要性可見一斑。蕓薹屬十字花科作物再生體系中主要選用子葉、子葉柄、下胚軸和花藥作為外植體，其中子葉柄再生效果最好，分化率也最佳。通過改變不同時期的生長素和細胞分裂素的濃度比，誘導外植體經歷形成愈傷組織、誘導不定芽、刺激生根等階段最終獲得再生苗，然而蕓薹屬的不同的作物種類、不同的品種對激素的敏感程度都不相同，相同基因型不同的外植體間的再生能力也存在差異，這也是其離體再生的一大困難之處。

近年來，對小白菜的離體再生體系研究甚少，主要是因為小白菜具有AA基因組，相比蕓薹屬的黑芥(BB基因組)、甘藍(CC基因組)等其他作物，小白菜的外植體離體培養出再生植株的能力較低，且后期誘導生根階段也存在相應的困難，這使小白菜遺傳改良技術的應用受到限制。因此，若是能順利建立出一個高效穩定的再生轉化體系，就能為后期小白菜遺傳改良提供巨大的便利。

發明內容

為克服現有技術存在的上述不足，本發明提供一種構建高效的小白菜離體再生體系的方法，為今后小白菜的遺傳改良奠定基礎。本發明通過以下技術方案實現：一種構建小白菜離體再生體系的方法，包括以下步驟：

(1)對選定品種的小白菜種子進行預處理后培養；

(2)切取步驟(1)的3～6天苗嶺的子葉，進行分化培養，確定不定芽誘導效率高的苗齡；

(3)于步驟(2)確定的不定芽誘導效率高的苗齡期，切取步驟(1)的子葉，分別進行分化培養，確定不定芽誘導效率高的分化培養基；

(4)切取步驟(1)的子葉，通過步驟(3)確定的所述分化培養基進行分化培養；

(5)將步驟(4)所得植株移入壯苗培養基進行培養；

(6)將步驟(5)所得植株移入生根培養基進行培養。

優選的，還包括步驟(7)：將步驟(6)所得植株進行煉苗處理后土培。

優選的，在步驟(1)中所選定的品種通過以下步驟確定：將不同品種的小白菜進行不定芽誘導實驗，通過比較各品種子葉柄的不定芽誘導率、平均芽數以及不定芽形態，選定綜合條件優異的品種。

優選的，在步驟(1)中，所選定的小白菜的品種為春優三。

優選的，在步驟(2)中，所確定的苗齡為4天。

優選的，在步驟(3)中，所述分化培養基包括MS、NAA、6-BA、AgNO3和ABA，所述6-BA的濃度為4～6mg/L。