[發(fā)明專利]一種超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811189916.0
• 申請(qǐng)日: 2018-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN109164255A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王軍;王旭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/543;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 南京匯盛專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

1.一種超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，待檢小分子物質(zhì)為抗原、配體、生物素、底物和多糖中的一種或兩種以上,其特征在于包括如下步驟：

（1）分別采用各待檢測(cè)小分子標(biāo)記固相載體；分別采用各熒光探針標(biāo)記通過(guò)特異性作用識(shí)別所述各待檢測(cè)小分子的物質(zhì)，獲得熒光標(biāo)記物；

（2）將各待檢測(cè)小分子標(biāo)記的固相載體和各熒光標(biāo)記物加入樣品溶液中進(jìn)行反應(yīng)；

（3）反應(yīng)結(jié)束后，分離固相載體，釋放固相載體表面結(jié)合的熒光探針；

（4）采用單分子檢測(cè)方法檢測(cè)所述熒光探針，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算樣品溶液中各待測(cè)小分子濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，其特征在于：當(dāng)所述待檢小分子為抗原時(shí)，通過(guò)特異性作用識(shí)別待檢測(cè)小分子的物質(zhì)為抗體；當(dāng)所述待檢小分子為配體時(shí)，通過(guò)特異性作用識(shí)別所述待檢測(cè)小分子的物質(zhì)為受體；當(dāng)所述待檢小分子為底物時(shí)，通過(guò)特異性作用識(shí)別所述待檢測(cè)小分子的物質(zhì)為酶；當(dāng)所述待檢小分子為多糖時(shí)，通過(guò)特異性作用識(shí)別所述待檢測(cè)小分子的物質(zhì)為凝集素；當(dāng)所述待檢小分子為生物素時(shí)，通過(guò)特異性作用識(shí)別所述待檢測(cè)小分子的物質(zhì)為親和素或鏈霉親和素。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，其特征在于所述固相載體為高吸附微孔板、磁珠、聚苯乙烯微球、乳膠微球、碳納米管或金屬納米顆粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，其特征在于通過(guò)共價(jià)或非共價(jià)的方式將各待檢測(cè)小分子標(biāo)記在固相載體表面、將熒光探針標(biāo)記通過(guò)特異性作用識(shí)別各待檢測(cè)小分子的物質(zhì)；所述共價(jià)方式包括通過(guò)活化羧基與氨基反應(yīng)、點(diǎn)化學(xué)反應(yīng)、醛基與氨基反應(yīng)或巰基與馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)；所述非共價(jià)方式為通過(guò)物理吸附或通過(guò)生物素與親和素相互作用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，其特征在于通過(guò)加入釋放緩沖液或者加熱的方法釋放固相載體表面結(jié)合的熒光探針或者通過(guò)使用巰基化合物切斷二硫鍵、高碘酸鈉氧化切斷鄰位二羥基或光切割鄰位硝基苯衍生物的方法釋放固相載體表面結(jié)合的熒光探針。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，其特征在于所述標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的自變量為各待檢小分子的濃度，因變量為檢測(cè)信號(hào)值。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，其特征在于步驟（2）的反應(yīng)體系中標(biāo)記在固相載體表面的待檢測(cè)小分子的終濃度為0.1 pg/mL-1mg/mL，熒光標(biāo)記物的終濃度為0.1 pg/mL-1mg/mL，所述反應(yīng)體系是將各待檢測(cè)小分子標(biāo)記的固相載體和各熒光標(biāo)記物加入樣品溶液后形成的。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述超靈敏檢測(cè)小分子物質(zhì)的方法，其特征在于所述小分子物質(zhì)為黃曲霉毒素B1。