[發明專利]一種以LRP10基因作為大河烏豬眼肌面積和背膘厚的遺傳標記

有效

• 申請號: 201811185525.1
• 申請日: 2018-10-11
• 公開（公告）號: CN109055577B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 李祥;劉永剛;牛元力
• 申請（專利權）人: 云南東恒經貿集團豬育種有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京卓特專利代理事務所(普通合伙) 11572
• 代理人: 段宇

1.一種大河烏豬眼肌面積和背膘厚的遺傳標記，其特征在于，所述的遺傳標記核苷酸序列如下所示：

ctacttccctccttgttcNtcagtctgaggggacatgatgggctttccattgatgacaggtagctgcgttaaagttaggtgtccctcaggcagggagagggctcacacagagccccttctgcacatggccagagaccacaggccaccaccaccaccatttgggtggctgattttaaaaggtaaagttcttaaagggtcataggcctggacactccatccttgccaaaccgccacccaaaagtggccttaagcacaatgccaattggctgggacttccagctcccaaggggaggatttgggcagggcctgaggttttgcctacagggatccctcccagaaggcctggctcataaaaagagcacaacaaatgcttttgtcccatagctaggtcattgc；所述的核苷酸序列中的N是c或a，導致多重PCR多態性。

2.一種檢測權利要求1的所述遺傳標記的特異PCR引物，其特征在于：所述特異PCR引物包含引物1、引物2、引物3，所述的引物1為5′-CTACTTCCCTCCTTGTTC-3′，所述的引物2為5′-AGTGGCCTTAAGCACTAG-3′，所述的引物3為5′-GCAATGACCTAGCTATGG-3′。

3.一種權利要求1所述遺傳標記的檢測方法，其特征在于，它包含以下步驟：

步驟一、從豬血液中提取基因組DNA；所述豬為大河烏豬；

步驟二、根據豬LRP10基因序列和權利要求2所述的三條遺傳標記特異PCR引物，用該三條引物在豬基因組DNA中進行PCR擴增，得到PCR產物；

步驟三、將步驟二中得到的PCR產物用2.5％的含有溴化乙錠的瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結果，凝膠成像系統觀察并記錄權利要求1所述的遺傳標記的核苷酸序列第19位堿基N的基因型；

步驟四、根據條帶差異，可將步驟三中的基因型分為兩種基因型，即只有157bp一條帶的是AA型，同時具有396bp、157bp兩條帶的是CC型。

4.根據權利要求3所述的所述的檢測方法，其特征在于：步驟二中的擴增區域為豬LRP10基因mRNA的3′-UTR部分基因組核苷酸序列，反應體系：2.0μL DNA，2.5μL 2mM mixeddNTPs，2.5μL 10×TaqDNA polymerase buffer，2.5μL 25mM MgCl₂，1μL 20μM引物1，1μL20μM引物2，1μL 20μM引物3，1unit of Taq DNA polymerase，11.5μL無菌水。

5.根據權利要求3所述的所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟二中的PCR程序為：94℃4min，35個循環94℃50s，53℃50s，72℃1min，然后72℃10min，最后4℃終止反應。

6.權利要求1所述的遺傳標記在大河烏豬眼肌面積和背膘厚性狀輔助選擇中的應用。