[發明專利]腸道微生物作為膽管細胞癌診斷標志物的用途

有效

• 申請號: 201811175998.3
• 申請日: 2018-10-10
• 公開（公告）號: CN109266766B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 賈曉東;陸蔭英;盧姍姍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三0二醫院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;G01N33/569;C12R1/01;C12R1/225
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 朱萍;李紅偉

本發明公開了糞便中的腸道細菌在膽管細胞癌的篩查、診斷或輔助診斷中的應用。本發明通過提取糞便中細菌的DNA并測序從而獲得細菌種類和豐度的特征，并以細菌的豐度特征為基礎進行膽管細胞癌的診斷。與目前已用于臨床或申請專利的篩選膽管細胞癌的方法相比，本發明完全無創，而且能更準確的預測診斷膽管細胞癌。

技術領域

本發明涉及生物技術、疾病診斷和生物醫藥領域，具體涉及膽管細胞癌的微生物標志物及其應用。

背景技術

肝臟占位性病變可以是良性或惡性的腫瘤，惡性腫瘤可以是轉移的或原發的。原發性肝癌(primary carcinoma of the liver)是我國常見惡性腫瘤之一。原發性肝癌主要類型為肝細胞肝癌(hepatocelluler carcinoma,HCC)和肝內膽管細胞癌(intrahepaticcholangiocarcinoma，ICC)。目前對于原發性肝癌手術后患者進行病理學診斷的原則主要根據手術切除腫瘤組織的組織學檢查和患者臨床檢查等做出。由于肝細胞肝癌和肝內膽管細胞癌組織形態相近、免疫表型交叉，在臨床病理診斷中常常出現困難；另一方面，兩者的治療方式和預后均不同，肝內膽管細胞癌發展更快，預后更差，需要更好地區別兩類腫瘤，對患者進行針對性治療，從而提高病人生活質量和減輕患者經濟負擔。

現有鑒別肝細胞肝癌和肝內膽管細胞癌的標記物有AFP/CA199/Hep Par1/CK19等，但是由于其敏感性和特異性不高，目前在臨床診療中應用價值有限，往往難以解決病理診斷問題。

腸道微生物是存在于人體腸道中的微生物群落，是人體的“第二基因組”。人腸道菌群和宿主構成一個相互關聯的整體，具有重要作用，包括形成微生物屏障防止病原菌定植、執行免疫調節及代謝功能。腸道微生物數量、結構及穩定性的改變，尤其是菌群的失衡會改變機體的免疫狀態。研究表明腸道菌群失衡與某些疾病的發生發展息息相關，包括糖尿病、帕金森癥等，然而有時腸道菌群失衡并不直接導致疾病的表達，而作為疾病標記。隨著人體基因組測序完成及高通量測序技術的高速發展，基因篩查成為診斷的方向。因此通過對腸道菌群的研究篩選出與膽管細胞癌相關性高的生物標志物有重要意義。一方面，利用膽管細胞癌有關的生物標記物可以提供診斷膽管細胞癌的方法。另一方面，通過將獲得的生物標志物中的某些保護性微生物進行分離、純化、培養和加上制成益生菌，可以用于改善并恢復腸道微生物平衡，對于膽管細胞癌治療具有重要意義。

目前，尚無研究闡述膽管細胞癌相關的腸道菌群生物標志物。

發明內容

本發明的目的是提供特異性的針對膽管細胞癌的腸道微生物標志物，為早期膽管細胞癌的檢測和評估提供一種非侵入式的，無創的方法。另外，通過將獲得的腸道微生物標志物中的某些保護性微生物進行分離、純化、培養和加工制成益生菌，可以用于改善并恢復腸道微生物平衡，對于降低有害微生物，減少毒性物質的產生，減輕膽管細胞癌的癥狀具有重要意義。

本發明的第一個方面提供了一種膽管細胞癌標志物，所述標志物是Lactobacillus屬腸道微生物和/或Alloscardovia屬腸道微生物。

本發明的第二個方面提供了前面所述的標志物在制備診斷膽管細胞癌的產品中的應用。

進一步，所述產品包括能檢測出前面所述的標志物的試劑，包含所述試劑的試劑盒、芯片或高通量測序平臺。

更進一步，所述試劑包括引物、探針、反義寡核苷酸、適配體或抗體。

本發明的第三個方面提供了一種診斷膽管細胞癌的產品，所述產品能夠檢測Lactobacillus屬腸道微生物和/或Alloscardovia屬腸道微生物。

優選地，所述產品能夠檢測Lactobacillus屬腸道微生物和/或Alloscardovia屬腸道微生物的豐度。

進一步，所述產品包括能檢測出前面所述的標志物的試劑，包含所述試劑的試劑盒、芯片或高通量測序平臺。