[發(fā)明專(zhuān)利]一種改良的固體培養(yǎng)基制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811175584.0
• 申請(qǐng)日: 2018-10-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109197589A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李彥強(qiáng);吳照祥;劉騰云;余發(fā)新
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江西省科學(xué)院生物資源研究所
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明提供了一種改良的固體培養(yǎng)基制備方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述方法包括以下步驟：1)將大量元素、微量元素、鐵鹽、植物激素和水混合后，得水溶性培養(yǎng)液；2)將植物凝膠、蔗糖、肌醇與水混合溶解后，得有機(jī)培養(yǎng)液；3)將所述水溶性培養(yǎng)液與所述有機(jī)培養(yǎng)液按照體積比為1：(1.2～3.5)混合，調(diào)節(jié)pH，得液體培養(yǎng)基；4)將步驟3)得到的所述液體培養(yǎng)基均勻分配至培養(yǎng)容器中，滅菌后冷卻得固體培養(yǎng)基；步驟1)與步驟2)之間不存在時(shí)間上的先后關(guān)系。本發(fā)明所述方法打破了傳統(tǒng)植物凝膠先高溫溶解，再與激素等混合，高溫分裝的培養(yǎng)基制備模式，本發(fā)明先分裝后高溫滅菌，操作簡(jiǎn)單，避免高溫分裝，效率較高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種改良的固體培養(yǎng)基制備方法。

背景技術(shù)

隨著植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的生物利用組織培養(yǎng)技術(shù)開(kāi)展大規(guī)模的育種工作，但是植物組織培養(yǎng)需要適宜的營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)條件，才能使植物細(xì)胞進(jìn)行正常的分化和生長(zhǎng)。而培養(yǎng)基則是給植物細(xì)胞提供養(yǎng)分的場(chǎng)所。培養(yǎng)基包括大量元素、微量元素、鐵鹽及螯合劑、糖和瓊脂。以目前最常用的培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基為例，在配置時(shí)需要分步配制母液，如將已添加其他物質(zhì)的瓊脂等植物凝膠營(yíng)養(yǎng)液先加熱溶解，溶解后傾倒或分裝到培養(yǎng)容器中，再高溫滅菌，步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。還有其他的配制方法如將高溫滅菌后培養(yǎng)基溶液傾倒或分裝到培養(yǎng)容器中，存在高溫作業(yè)和培養(yǎng)基被污染的問(wèn)題。而商業(yè)化的MS培養(yǎng)基，則價(jià)格較貴，不利于規(guī)模化組培育苗使用。目前并沒(méi)有一種方便簡(jiǎn)單且安全無(wú)污染的固體培養(yǎng)基制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于一種改良的固體培養(yǎng)基制備方法，操作簡(jiǎn)單，避免高溫分裝，效率較高。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種改良的固體培養(yǎng)基制備方法，包括以下步驟：

1)將大量元素、微量元素、鐵鹽、植物激素和水混合后，得水溶性培養(yǎng)液；

2)將植物凝膠、蔗糖、肌醇與水混合溶解后，得有機(jī)培養(yǎng)液；

3)將步驟1)得到的所述水溶性培養(yǎng)液與步驟2)得到的所述有機(jī)培養(yǎng)液按照體積比為1：(1.2～3.5)混合，調(diào)節(jié)pH，得液體培養(yǎng)基；

4)將步驟3)得到的所述液體培養(yǎng)基均勻分配至培養(yǎng)容器中，滅菌后冷卻得固體培養(yǎng)基；步驟1)與步驟2)之間不存在時(shí)間上的先后關(guān)系。

優(yōu)選的，步驟1)所述混合為攪拌混合，所述攪拌混合的轉(zhuǎn)速為80～150rpm，所述攪拌混合的時(shí)間為3～8min。

優(yōu)選的，步驟2)所述混合為攪拌混合，所述攪拌混合的轉(zhuǎn)速為120～200rpm。

優(yōu)選的，步驟3)所述混合為攪拌混合，所述攪拌混合的轉(zhuǎn)速為120～200rpm，所述攪拌的時(shí)間為1～5min。

優(yōu)選的，步驟3)所述調(diào)節(jié)pH后還包括以10～30rpm的轉(zhuǎn)速持續(xù)攪拌混合。

優(yōu)選的，步驟4)所述滅菌包括高溫滅菌。

優(yōu)選的，所述高溫滅菌的溫度為121℃，所述高溫滅菌的時(shí)間為20min。

本發(fā)明提供了一種改良的固體培養(yǎng)基制備方法，將水溶性培養(yǎng)液與有機(jī)培養(yǎng)液混合后，添加植物凝膠，利用植物凝膠特性使其混合液凝固，從而形成固體培養(yǎng)基，打破了植物凝膠高溫溶解混合再高溫滅菌后分裝的培養(yǎng)基制備模式，從而先分裝后高溫滅菌，操作簡(jiǎn)單，避免高溫分裝，效率較高。

附圖說(shuō)明

圖1為分液裝置。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種改良的固體培養(yǎng)基制備方法，包括以下步驟：