[發(fā)明專利]一種提取血漿外泌體的試劑盒及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811174596.1 | 申請日： | 2018-10-09 |
| 公開（公告）號： | CN109266606A | 公開（公告）日： | 2019-01-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉國東;劉文舉;錢立生;張靜;于慶才;邱萬偉;李坤 | 申請（專利權(quán)）人： | 安徽科技學院 |
| 主分類號： | C12N5/078 | 分類號： | C12N5/078;G01N21/31 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務(wù)所 11569 | 代理人： | 劉奇 |
| 地址： | 233100 *** | 國省代碼： | 安徽;34 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 血漿 試劑盒 分子生物學領(lǐng)域 磁分離裝置 鏈霉親和素 生物素修飾 適配體溶液 特異性結(jié)合 納米磁珠 適配 修飾 需求量 體能 應(yīng)用 | ||
1.一種用于提取血漿外泌體的試劑盒，其特征在于，包括親和素修飾的納米磁珠溶液、生物素修飾的特異性適配體溶液和磁分離裝置；所述特異性適配體能與外泌體特異性結(jié)合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述特異性適配體的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，在所述親和素修飾的納米磁珠溶液中親和素的濃度為0.2～0.6mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述親和素修飾的納米磁珠溶液中親和素為鏈霉親和素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述親和素修飾的納米磁珠溶液中納米磁珠的粒徑為250～550nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述生物素修飾的特異性適配體溶液的濃度為50～150μmol/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括pH值7.2～7.4的PBS緩沖液。
8.權(quán)利要求1～7任一項所述試劑盒在提取血漿外泌體中的應(yīng)用，所述血漿外泌體為正常生理狀況下產(chǎn)生的生理功能型外泌體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將親和素修飾的納米磁珠溶液和生物素修飾的特異性適配體溶液按照體積比1～2:2～4混合，在15～30℃條件下?lián)u動反應(yīng)40～80min，得到復(fù)合物溶液；
(2)將所述復(fù)合物溶液與血漿稀釋液按照體積比5～15:1～3混合，在15～30℃條件下?lián)u動反應(yīng)40～80min，得外泌體提取液；
(3)將所述外泌體提取液用磁分離裝置吸附，棄上清液，得到吸附有外泌體的磁珠復(fù)合物；
(4)用PBS緩沖液清洗和重懸所述磁珠復(fù)合物，得到結(jié)合外泌體的磁珠復(fù)合物溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，在所述步驟(2)血漿稀釋液中，血漿稀釋用溶液為權(quán)利要求7所述PBS緩沖液；血漿和血漿稀釋用溶液的體積比為1～3:5～15。
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