[發明專利]一種用于檢測白喉抗體的抗原蛋白、試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201811166323.2
• 申請日: 2018-10-08
• 公開（公告）號: CN109100517A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 華俊清;曾強;黃晶;王諾;羅玉東;吳邊
• 申請（專利權）人: 武漢生命科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉江煬

本發明涉及一種制備用于檢測白喉抗體的抗原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟：S1：將攜帶CRM197蛋白表達框的桿狀病毒表達載體感染昆蟲細胞中，得到感染的昆蟲細胞；S2：將感染后的昆蟲細胞培養進行培養增殖；S3：將增殖后的昆蟲細胞進行破碎，提取其中的抗原蛋白；還涉及該方法制備的抗原蛋白，還涉及包括該抗原蛋白的試劑盒。表達的CRM197蛋白安全無毒性、產量高、易于分離純化，同時與白喉抗體有很高的親和力、特異性好。

技術領域

本發明白喉防治領域，更特別地，涉及一種制備用于檢測白喉抗體的抗原蛋白的方法，該方法制備的抗原蛋白，以及包括該抗原蛋白的試劑盒。

背景技術

白喉(Diphtheria)是一種急性上呼吸道傳染病，由革蘭氏陽性白喉棒狀桿菌經空氣飛沫傳播引起。白喉外毒素是主要致病因素。其臨床特征為咽、喉、鼻等處粘膜充血、腫脹并有灰白色假膜形成，以及由細菌外毒素引起的全身中毒癥狀，嚴重者可有中毒性心肌炎和周圍神經麻痹。引入白喉疫苗前，白喉是引起兒童死亡的一個主要原因。現在許多發展中國家白喉仍然流行。白喉對人類帶來極大危害，尤其對兒童健康造成巨大威脅，在百白破疫苗問世之前病死率居高不下，可達到10％。WHO六大區域2010～2014年，平均有158個國家或地區有白喉報告。

白喉病后有較強的免疫力，主要是機體能產生中和白喉桿菌的抗體(IgG)。1～5歲易感性最高，5歲以上易感性逐漸下降，成人絕大多數由于隱性感染或預防接種，已獲得免疫力。臨床上對白喉的感染、實驗室診斷及其流行特征極為重視。隨著科學技術的發展和人民生活水平的提高，人們對優生優育的認識逐步提高，檢測白喉感染越來越受到重視。

免疫規劃工作一直以來都是政府工作的重點之一，兒童的預防免疫關乎其一生的健康，疫苗接種、疾病預防遠比疫病的治療更為重要。由于個體免疫水平的差異、疫苗質量、接種程序的規范與否以及隨時間推移抗體水平的逐漸下降等原因，疫苗接種后，大部分人群獲得了免疫保護，但仍有部分人群由于以上原因導致抗體水平低下，無法抵御相關傳染病的侵襲。開展抗體檢測，對抗體水平不足的人群進行有針對性的補種，對有效形成免疫屏障、預防傳染病的發生、保護相關人群的健康有著十分重要的意義。

目前檢測白喉抗體的方法主要有5種，包括錫克氏試驗、動物體內中和試驗、體外微孔培養物中和試驗、間接血凝試驗(IHA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。其中前兩項為體內試驗,后三項為體外實驗。用ELISA方法檢測白喉抗體有特異性強、重復性好、操作簡便、靈敏度高、耗時短并可同時測定大量樣品等特點，在有標準品并能夠繪制標準曲線時還可用于定量檢測白喉抗體。從實用、經濟以及人道角度考慮，可定量的ELISA技術越來越受到青睞。定量檢測由于能獲得準確的抗體水平，通過抗體定量就能準確了解機體的免疫水平，而且可連續檢測血清中抗體水平，以便對不同時間和地點的檢測結果進行比較。疫苗接種效果監測是檢測保護性抗體IgG，定性分析無法確定這種保護性抗體的強弱，同時定量檢測還可以對保護性抗體水平衰減情況進行監測。