[發(fā)明專利]一種利用海洋真菌大規(guī)模制備色氨酸-丙氨酸環(huán)二肽的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811165767.4
• 申請(qǐng)日: 2018-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN109136111B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳敏;梁朝陽(yáng);王長(zhǎng)云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州藍(lán)色生物醫(yī)藥科技有限公司;揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12P21/04;C07K11/02;C07K1/16;C12R1/645
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 于躍

1.一種海洋真菌Eurotium sp.WH3-4，其特征在于所述海洋真菌Eurotium sp.WH3-4的菌種保藏信息：保藏單位名稱：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；保藏單位地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏日期：2017年12月27日；保藏編號(hào)：CGMCC No.15097；分類命名：散囊菌Eurotium sp.。

2.一種由權(quán)利要求1所述的海洋真菌Eurotium sp.WH3-4制備L-色氨酸-L-丙氨酸環(huán)二肽的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)先在菌種培養(yǎng)基中對(duì)海洋真菌Eurotium sp.WH3-4進(jìn)行菌種培養(yǎng)；

(2)再在發(fā)酵培養(yǎng)基中對(duì)步驟(1)中的海洋真菌Eurotium sp.WH3-4進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；

(3)將步驟(2)得到的發(fā)酵物中的發(fā)酵液和菌體分離，發(fā)酵液用有機(jī)溶劑A萃取2～4次，合并萃取液后減壓濃縮得到發(fā)酵液浸膏；菌體用有機(jī)溶劑B浸提2～4次，合并浸提液后減壓濃縮得到菌體浸膏；合并發(fā)酵液浸膏和菌體浸膏，進(jìn)行色譜分離得粗品；

(4)步驟(3)得到的粗品經(jīng)重結(jié)晶或色譜分離，得到L-色氨酸-L-丙氨酸環(huán)二肽純品；

其中所述菌種培養(yǎng)基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、瓊脂、粗海鹽、水，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海鹽、水；

所述的有機(jī)溶劑A選自乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿或乙醚中的一種或幾種；

所述的有機(jī)溶劑B選自甲醇、乙醇、THF或丙酮中的一種或幾種。

3.權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的色譜分離選自正相硅膠柱色譜分離、反相硅膠柱色譜、大孔樹脂柱色譜分離或凝膠柱色譜分離中的一種或幾種組合。

4.權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的重結(jié)晶采用水、甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、氯仿、戊烷、己烷、乙酸乙酯或石油醚中的一種或幾種作為重結(jié)晶溶劑。

5.權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于菌種培養(yǎng)基含有葡萄糖0.2％–5.0％、酵母膏0.02％–2％、蛋白胨0.02％–2％、瓊脂0.2％–3.0％、粗海鹽0.05％–5％，適量的水；上述百分比均為重量百分比；培養(yǎng)溫度為15–25℃；培養(yǎng)時(shí)間為3–7天。

6.權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖0.2％–5.0％、酵母膏0.02％–2％、蛋白胨0.02％–2％、粗海鹽0.05％–5％，適量的水；上述百分比均為重量百分比；培養(yǎng)溫度為15–25℃；培養(yǎng)時(shí)間為3–5周。

7.權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述的正相硅膠柱色譜分離中采用的固定相的硅膠目數(shù)為100～200目、200～300目或300～400目；流動(dòng)相為乙酸乙酯/石油醚體積比為1/4～1/3的混合溶劑或者甲醇/二氯甲烷體積比為1/15～1/10的混合溶劑。

8.權(quán)利要求1所述的海洋真菌Eurotium sp.WH3-4在制備L-色氨酸-L-丙氨酸環(huán)二肽中的應(yīng)用。