[發(fā)明專利]促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811164543.1
• 申請日: 2018-10-06
• 公開（公告）號: CN109161525A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙立士;陳名星
• 申請（專利權(quán)）人: 淮安康宜萊干細胞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的方法。骨髓間充質(zhì)干細胞是骨髓中成骨細胞的祖細胞，對其成骨性分化能力的研究一直是骨科領(lǐng)域的一大熱點，而促進其向成骨方向分化也是防治骨質(zhì)疏松癥的主要方法之一。目前，骨髓間充質(zhì)干細胞應(yīng)用的一個難點在于如何大量獲得骨髓間充質(zhì)干細胞。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，α?雪松烯、β?雪松烯和異雪松酮可以有效促進人骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖，且不會影響其多向分化能力，α?雪松烯、β?雪松烯和異雪松酮可以用作添加劑制備促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的培養(yǎng)基，可以制成促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，涉及一種促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的方法。

背景技術(shù)

骨髓間充質(zhì)干細胞是骨髓中成骨細胞的祖細胞，對其成骨性分化能力的研究一直是骨科領(lǐng)域的一大熱點，而促進其向成骨方向分化也是防治骨質(zhì)疏松癥的主要方法之一。

目前，骨髓間充質(zhì)干細胞應(yīng)用的一個難點在于如何大量獲得骨髓間充質(zhì)干細胞。

α-雪松烯、β-雪松烯、γ-雪松烯和異雪松酮為雪松中分離得到的化合物，化學結(jié)構(gòu)如下。

目前尚未見上述化合物在促進骨髓間充質(zhì)干細胞增殖方面的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的方法。

本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：

一種促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的方法，包括如下步驟：

采集新鮮骨髓，肝素鈉抗凝后加等量生理鹽水，Percoll細胞分離液密度梯度離心，取中間單核細胞層以低糖DMEM培養(yǎng)基清洗，接種入培養(yǎng)皿中，加入完全培養(yǎng)基后，置于5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后換液，棄未貼壁的細胞。以后每2～3d換液，待細胞生長至90％匯合后胰蛋白酶消化傳代培養(yǎng)；取傳代細胞，消化制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)于完全培養(yǎng)基中，37℃、5％CO₂培養(yǎng)24h后，更換為含藥完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；

所述含藥完全培養(yǎng)基含有有效濃度的異雪松酮。

優(yōu)選地，所述完全培養(yǎng)基為含10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基。

異雪松酮在制備促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的培養(yǎng)基中的應(yīng)用。

異雪松酮在制備促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的藥物中的應(yīng)用。

有益效果：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，α-雪松烯、β-雪松烯和異雪松酮可以有效促進人骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖，且不會影響其多向分化能力，α-雪松烯、β-雪松烯和異雪松酮可以用作添加劑制備促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的培養(yǎng)基，可以制成促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的藥物。

附圖說明

圖1為各組450nm測定吸光度；

圖2為茜素紅染色結(jié)果，其中：A為對照組染色結(jié)果，B為α-雪松烯組染色結(jié)果，C為β-雪松烯組染色結(jié)果，D為異雪松酮組染色結(jié)果；

圖3為油紅O染色結(jié)果，其中：A為對照組染色結(jié)果，B為α-雪松烯組染色結(jié)果，C為β-雪松烯組染色結(jié)果，D為異雪松酮組染色結(jié)果。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和實施例具體介紹本發(fā)明實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護范圍。

一、實驗材料

DMEM/F12培養(yǎng)基、低糖DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Gibco公司。α-雪松烯、β-雪松烯、γ-雪松烯和異雪松酮自制或購買，純度不低于98％。