[發(fā)明專利]LC-MS/MS測定去氧腎上腺素濃度的方法及樣品的前處理方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811160674.2
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109187832B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設計）人: 陳光磊;李黎;王勇;馬鵬崗;楊彥佳
• 申請（專利權）人: 華潤三九醫(yī)藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權代理有限公司 11250
• 代理人: 李靜

本發(fā)明涉及醫(yī)藥檢測技術領域，具體涉及一種LC?MS/MS測定去氧腎上腺素濃度的方法，包括一次提取：向所述樣品中加入內(nèi)標工作液和提取液，混合均勻后離心分層，收集上層液得第一上清液；衍生反應：將所述第一上清液濃縮干燥后，加入NaHCO₃緩沖鹽溶解，然后加入丹酰氯的乙腈溶液進行衍生反應；二次提取：向所述衍生反應后的反應液中加入提取液進行二次提取，離心得第二上清液，將第二上清液濃縮干燥后復溶，得到樣品溶液；本發(fā)明的樣品的前處理方法能夠最大程度上提高前處理方法對低含量的去氧腎上腺素的提取率，有效去除血漿基質的干擾，提高特異性，最低檢測限降低至0.02ng/ml，靈敏度提高至0.1nM，以適應于藥物臨床研究中對低濃度去氧腎上腺素濃度的檢測要求。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥檢測技術領域，具體涉及一種LC-MS/MS測定去氧腎上腺素濃度的方法，以及適用的生物樣品分析的前處理方法。

背景技術

去氧腎上腺素是一種兒茶酚胺類選擇性ɑ1受體激動劑，主要用于防治脊椎麻醉、全身麻醉、應用氯丙嗪等原因引起的低血壓，也用于室上性心動過速和散瞳檢查，去氧腎上腺素是一種可以代替?zhèn)温辄S堿的非處方藥物。

目前，臨床上使用的去氧腎上腺素類鼻粘膜減充血藥，由于其中的活性成分去氧腎上腺素在體內(nèi)的血漿半衰期短，通常需要每隔四小時給藥一次以緩解鼻充血。因此，為了延緩釋藥時間、提高治療效果和降低毒副作用，藥學工作者致力于開發(fā)去氧腎上腺素的新劑型和新工藝。但是，在去氧腎上腺素的人體藥代動力學研究中發(fā)現(xiàn)，由于人體內(nèi)去氧腎上腺素的給藥量很低(每次口服劑量為5-20mg)，導致給藥后血漿中去氧腎上腺素的含量也很低(去氧腎上腺素的C_max不高于5nM)，目前有關低含量的血漿中去氧腎上腺素濃度的測定方法還未見報道，而血漿中去氧腎上腺素的濃度的準確測定是去氧腎上腺素藥代動力學研究的基礎，這對于去氧腎上腺素的新藥開發(fā)或者仿制藥的研發(fā)具有至關重要的意義，因此，如何準確測定血漿中去氧腎上腺素的濃度成為去氧腎上腺素的藥代動力學研究的重點和難點。

中國專利文獻CN106442837A公開了一種液相色譜串聯(lián)質譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法，該方法包括步驟：標準品制備，液相色譜分離，質譜檢測并制標準曲線，血漿中兒茶酚胺的檢測。該方法采用乙腈進行蛋白沉淀，丹磺酰氯進行衍生反應，提取后使用液相色譜串聯(lián)三重四級桿進行衍生反應，可以同時定量測定血漿中包括多巴胺、腎上腺素、去甲腎上腺素的3種兒茶酚胺，但是，利用該檢測方法對血漿中去氧腎上腺素的濃度進行檢測時，因樣品的前處理過程對去氧腎上腺素和其中含有的雜質分離不徹底，使得該檢測方法的靈敏度為2.1nM，仍然不能滿足藥代動力學對檢測方法的靈敏度要求即1/10的C_max或者1/20的C_max，且高于部分實際的待測血漿中去氧腎上腺素的濃度，因而無法準確檢測血漿中較低含量的去氧腎上腺素的濃度，回收率偏低，測量誤差較大，因此，亟需開發(fā)出一種新的血漿中去氧腎上腺素的樣品的前處理方法，尤其適用于LC-MS/MS測定血漿中去氧腎上腺素的濃度的方法。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明所要解決的技術問題在于現(xiàn)有技術中的濃度檢測方法采用的樣品的前處理方法對目標化合物和雜質分離不徹底而導致檢測方法的定量限較高、靈敏度較低，無法準確測定血漿樣品中低含量的去氧腎上腺素的濃度，進而提供一種血漿中去氧腎上腺素的樣品的前處理方法，尤其適用于LC-MS/MS測定血漿中去氧腎上腺素的方法。

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種血漿中去氧腎上腺素的樣品的前處理方法，包括，

一次提取：向所述樣品中加入內(nèi)標工作液和提取液，混合均勻后離心分層，收集上層液得第一上清液；

衍生反應：將所述第一上清液濃縮干燥后，加入NaHCO₃緩沖鹽溶解，然后加入丹酰氯的乙腈溶液進行衍生反應；

二次提取：向所述衍生反應后的反應液中加入提取液進行二次提取，離心得第二上清液，將第二上清液濃縮干燥后復溶，得到樣品溶液；