[發(fā)明專利]檢測NAT2基因突變分型的引物、試劑盒和方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811157443.6 | 申請日： | 2018-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN109337970A | 公開（公告）日： | 2019-02-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 牛林梅;吳鵬飛;王淑一 | 申請（專利權(quán)）人： | 杭州艾迪康醫(yī)學檢驗中心有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6883 | 分類號： | C12Q1/6883;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 310030 浙江省杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 代謝表型 分型 引物 突變 個體化治療 核苷酸序列 分型檢測 基因突變 檢測結(jié)果 擴增檢測 藥物代謝 對引物 抗結(jié)核 試劑盒 異煙肼 種檢測 檢測 治療 | ||
本發(fā)明公開了一種檢測與異煙肼等藥物代謝有關(guān)的NAT2(N?acetyltransferase 2,NAT2)基因突變分型的引物和方法，其包括擴增檢測核苷酸序列的2對引物；采用PCR擴增技術(shù)和Sanger測序技術(shù)。本發(fā)明可快速地將NAT2基因突變分型檢測出來，并可判斷其代謝表型。利用本發(fā)明完成的檢測結(jié)果準確，在抗結(jié)核治療時，可結(jié)合患者NAT2基因型的不同或代謝表型實施個體化治療方案。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及檢測與異煙肼等藥物代謝有關(guān)的NAT2基因分型的引物和方法。
背景技術(shù)
結(jié)核病(TB)是由結(jié)核分枝桿菌引起的以肺部病變?yōu)橹鞯穆詡魅拘约膊 ＝陙砥浒l(fā)病率在全球范圍內(nèi)都有升高的趨勢。在WHO推薦的標準抗結(jié)核化療方案中，異煙肼是不可替代的一線抗結(jié)核藥，其常見的不良反應(yīng)有肝損傷、胃腸道反應(yīng)和皮疹等。抗結(jié)核藥物誘導(dǎo)的肝損傷(anti-tuberculosisdrug-induced hepatotoxicity,ATDH)在結(jié)核病標準治療中發(fā)生率約為2％～28％，是結(jié)核患者停止化療的最常見原因之一。ATDH如果沒有及時發(fā)現(xiàn)并停止用藥，將導(dǎo)致患者肝衰竭甚至死亡。
異煙肼為胺類化合物，在體內(nèi)通過N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶2(N-acetyltransferase 2,NAT2)代謝，最終產(chǎn)生無毒的乙酰肼及二乙酰肼。N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶2由NAT2基因編碼，是藥物二相代謝酶，催化乙酰基團從乙酰CoA轉(zhuǎn)移到其作用底物芳香胺及雜環(huán)胺類物質(zhì)上，在人體對芳香胺類及雜環(huán)類物質(zhì)的活化和(或)滅活以及某些藥物的代謝過程中起著重要的作用。
NAT2基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)可引起相應(yīng)代謝酶含量或酶活性的改變，從而影響個體的藥物代謝能力。NAT2基因多態(tài)性由其編碼區(qū)的點突變所造成，根據(jù)野生型與突變型的組合形成不同的基因型：野生純合的快乙酰型、野生突變雜合的中間型、突變純合的慢乙酰型。研究發(fā)現(xiàn)快代謝型患者中極少出現(xiàn)藥物性肝損傷，慢代謝型患者較易出現(xiàn)藥物性肝損傷。
因此，在抗結(jié)核治療時，結(jié)合患者NAT2基因型的不同或代謝表型實施個體化治療方案：對慢代謝型患者，在治療初期減少異煙肼的用量，可減少藥物不良反應(yīng)，提高患者依從性；對快代謝型患者，則適當增加異煙肼劑量，可提高早期療效。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測NAT2基因突變分型的引物，采用PCR技術(shù)，可用于快速檢測結(jié)核病患者NAT2基因分型并判斷患者的代謝表型。
檢測NAT2基因突變分型的引物，其特征在于所使用的擴增引物和測序引物均為：
NAT2-1-F：CGAGGAAATCAAATGCTAAAG
NAT2-1-R：GCTCTCTCCTGATTTGGTCC
NAT2-2-F：AGGATCAGCCTCAGGTGC
NAT2-2-R：TTTTATGGATGAAAGTATTTGATG。
本發(fā)明還提供了檢測NAT2基因突變分型的試劑盒，包括
①血液樣本DNA抽提試劑；
②檢測體系PCR擴增反應(yīng)試劑；包括擴增引物
③測序體系試劑；包括測序引物；
④陽性對照品和陰性對照品。
其中，擴增引物和測序引物堿基序列均為：
NAT2-1-F：CGAGGAAATCAAATGCTAAAG
NAT2-1-R：GCTCTCTCCTGATTTGGTCC
NAT2-2-F：AGGATCAGCCTCAGGTGC
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