[發(fā)明專(zhuān)利]一種小球藻細(xì)胞表面耗氧保護(hù)層的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811156727.3
• 申請(qǐng)日: 2018-09-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109251865B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃鑫;蘇東悅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/12
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 岳泉清

1.一種小球藻細(xì)胞表面耗氧保護(hù)層的制備方法，其特征在于小球藻細(xì)胞表面耗氧保護(hù)層的制備方法具體是按以下步驟進(jìn)行的：

一、蛋白核小球藻細(xì)胞的培養(yǎng)：選擇蛋白核小球藻作為生物模板，利用TAP培養(yǎng)基在溫度為25～30℃的光照培養(yǎng)箱中持續(xù)光照1200～4800LUX進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)?shù)鞍缀诵∏蛟寮?xì)胞數(shù)目達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)進(jìn)行包覆，得到生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的蛋白核小球藻細(xì)胞；

二、先采用濃度為0.01～0.06mol/L的NaCl溶液對(duì)生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的蛋白核小球藻細(xì)胞進(jìn)行清洗，再采用去離子水對(duì)生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的蛋白核小球藻細(xì)胞進(jìn)行清洗，離心收集細(xì)胞，將收集到的細(xì)胞加入到Tris緩沖溶液中，得到細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液；將多巴胺加入到細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液中，攪拌反應(yīng)0.5～3h，反應(yīng)完成后，采用去離子水清洗，離心收集，得到聚多巴胺修飾的蛋白核小球藻細(xì)胞；所述細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液的OD值為1.0～3.0；所述多巴胺的質(zhì)量與細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液的體積比為1mg:(0.1～2.5)mL；

三、將漆酶溶解在醋酸-醋酸鈉溶液中，得到漆酶溶液，調(diào)節(jié)pH為5～7，將漆酶溶液加入到聚多巴胺修飾的蛋白核小球藻細(xì)胞中，攪拌反應(yīng)0.5～3h，反應(yīng)完成后，采用去離子水清洗，離心收集，得到聚多巴胺-漆酶修飾的蛋白核小球藻細(xì)胞；所述漆酶溶液的濃度為0.5～3mg/mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻細(xì)胞表面耗氧保護(hù)層的制備方法，其特征在于步驟二中所述細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液的OD值為2.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻細(xì)胞表面耗氧保護(hù)層的制備方法，其特征在于步驟二中所述多巴胺的質(zhì)量與細(xì)胞培養(yǎng)緩沖液的體積比為1mg:0.375mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻細(xì)胞表面耗氧保護(hù)層的制備方法，其特征在于步驟二中所述Tris緩沖溶液的pH值為8～9。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻細(xì)胞表面耗氧保護(hù)層的制備方法，其特征在于步驟三中所述醋酸-醋酸鈉溶液的pH值為4～5。