[發明專利]一種可檢測活細胞內金屬離子的熒光檢測探針

有效

• 申請號: 201811155536.5
• 申請日: 2018-09-30
• 公開（公告）號: CN109307664B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 匡華;高銳;胥傳來;徐麗廣;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學;無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種可檢測活細胞內金屬離子的熒光檢測探針，其特征在于，是修飾有巰基化DNA4的AuNRs@Pt二聚體、修飾有巰基化DNA7的上轉換納米粒子，與熒光基因修飾的DNA3、熒光基因修飾的DNA5、熒光淬滅基團TAMRA修飾的DNA6以及DNA8的混合孵育物；所述修飾有巰基化DNA4的AuNRs@Pt二聚體是AuNRs@Pt-DNA1以及AuNRs@Pt-DNA2的孵育物；

所述DNA1為與DNA2的活性部位互補或部分互補的序列；

所述DNA2為鋅離子特異性DNA酶；

所述DNA3為與DNA2的非活性部位互補或部分互補的序列；

所述DNA4為鎂/銅離子特異性DNA酶；

所述DNA5為與DNA4的活性部位互補或部分互補的序列；

所述DNA6為與DNA4的非活性部位互補或部分互補的序列；

所述DNA7為與DNA4的非活性部位互補或部分互補的序列；

所述DNA8為與DNA4的活性部位互補或部分互補的序列。

2.如權利要求1所述的一種可檢測活細胞內金屬離子的熒光檢測探針，其特征在于，所述DNA1的核苷酸序列為SEQ ID NO.1；所述DNA2的核苷酸序列為SEQ ID NO.2；所述DNA3的核苷酸序列為SEQ ID NO.3；所述DNA4的核苷酸序列為SEQ ID NO.4；所述DNA5的核苷酸序列為SEQ ID NO.5；所述DNA6的核苷酸序列為SEQ ID NO.6；所述DNA7的核苷酸序列為SEQID NO.7；所述DNA8的核苷酸序列為SEQ ID NO.8。

3.如權利要求1所述的一種可檢測活細胞內金屬離子的熒光檢測探針，其特征在于，所述熒光檢測探針的制備方法為將鉑包裹的金納米棒溶液與巰基聚乙二醇溶液混合后進行反應，得到金納米棒-聚乙二醇復合物溶液；將金納米棒-聚乙二醇復合物溶液分成兩份，將兩份金納米棒-聚乙二醇復合物溶液分別與巰基化的DNA1、巰基化的DNA2混合后進行孵育，得到金納米棒-聚乙二醇-DNA1復合物溶液以及金納米棒-聚乙二醇-DNA2復合物溶液；將AuNRs@Pt-DNA1溶液以及AuNRs@Pt-DNA2溶液混合并進行反應，反應結束后，再與巰基化的DNA4混合并進行反應，得到修飾有巰基化DNA4的AuNRs@Pt二聚體溶液；將上轉換納米粒子溶液與Tris-HCl緩沖液混合后，將混合得到的混合液與巰基化的DNA7混合并進行孵育，得到修飾有巰基化DNA7的上轉換納米粒子溶液；將修飾有巰基化DNA4的AuNRs@Pt二聚體溶液與修飾有巰基化DNA7的上轉換納米粒子溶液混合后，將混合得到的混合液與熒光基因修飾的DNA3、DNA5、熒光淬滅基團TAMRA修飾的DNA6以及DNA8混合并進行孵育，得到可檢測活細胞內金屬離子的熒光檢測探針溶液。

4.如權利要求2所述的一種可檢測活細胞內金屬離子的熒光檢測探針，其特征在于，所述熒光檢測探針的制備方法為將鉑包裹的金納米棒溶液與巰基聚乙二醇溶液混合后進行反應，得到金納米棒-聚乙二醇復合物溶液；將金納米棒-聚乙二醇復合物溶液分成兩份，將兩份金納米棒-聚乙二醇復合物溶液分別與巰基化的DNA1、巰基化的DNA2混合后進行孵育，得到金納米棒-聚乙二醇-DNA1復合物溶液以及金納米棒-聚乙二醇-DNA2復合物溶液；將AuNRs@Pt-DNA1溶液以及AuNRs@Pt-DNA2溶液混合并進行反應，反應結束后，再與巰基化的DNA4混合并進行反應，得到修飾有巰基化DNA4的AuNRs@Pt二聚體溶液；將上轉換納米粒子溶液與Tris-HCl緩沖液混合后，將混合得到的混合液與巰基化的DNA7混合并進行孵育，得到修飾有巰基化DNA7的上轉換納米粒子溶液；將修飾有巰基化DNA4的AuNRs@Pt二聚體溶液與修飾有巰基化DNA7的上轉換納米粒子溶液混合后，將混合得到的混合液與熒光基因修飾的DNA3、DNA5、熒光淬滅基團TAMRA修飾的DNA6以及DNA8混合并進行孵育，得到可檢測活細胞內金屬離子的熒光檢測探針溶液。