[發明專利]一種保護血細胞的中藥提取物及其制備方法與用途

在審

• 申請號: 201811151764.5
• 申請日: 2018-09-29
• 公開（公告）號: CN109221086A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 屈長青;苗華雪;陶恒港;岳少云;單康慧;張復平
• 申請（專利權）人: 阜陽師范學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 宋平

1.一種用于保護血細胞的中藥提取物的制備方法，所述中藥提取物的活性成分來自香椿。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述中藥提取物的活性成分來自香椿的多糖；和/或所述保護血細胞是對血細胞的凍存的保護；和/或所述血細胞是雞血細胞。

3.如權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述中藥提取物的制備方法包括如下步驟：

(a)煎煮香椿，過濾，取濾液，形成第一混合物；

(b)用乙醇處理所述第一混合物，形成第二混合物；

(c)抽濾所述第二混合物，得濾液，形成第三混合物；

(d)離心所述第三混合物，取上清，即初級香椿提取物溶液。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述中藥提取物的制備方法還包括如下步驟：

(e)除去所述初級香椿提取物溶液中的蛋白，得到香椿提取物粗品；

優選地，所述中藥提取物的制備方法還包括如下步驟：

(f)將所述香椿提取物粗品凍干。

5.如權利要求3或4所述的制備方法，其特征在于：

所述香椿選自香椿葉粉末；

可選地，在步驟(a)之前，先用水浸泡香椿，優選15-45min，更優選30min；

可選地，用水煎煮步驟(a)產生的藥渣，過濾，取濾液與步驟(a)產生的所述濾液合并使用；

優選地，在步驟(b)中，用50-70％優選60％的乙醇處理所述第一混合物，形成所述第二混合物；

可選地，用乙醇洗滌步驟(a)產生的濾渣，過濾，取濾液與步驟(b)產生的所述第二混合物合并使用；

可選地，在步驟(c)中，使用真空抽濾泵在0.5-1.0bar下進行抽濾，優選地，使用真空抽濾泵在0.8bar下進行抽濾；

可選地，在步驟(c)之前，靜置所述第二混合物，優選12-36h，更優選24h；

可選地，在步驟(d)中，3000-5000r/min離心所述第三混合物10-30min，優選4000r/min離心20min；

可選地，在步驟(e)中，將所述初級香椿提取物溶液與Sevage試劑按照體積比3-5:1優選4：1混合，振蕩，靜置，取出上清液，得到所述香椿提取物粗品，其中，所述Sevage試劑的成分為體積比為3-5:1優選4:1的氯仿與正丁醇混合液；

可選地，在步驟(f)中，在-80℃冰箱冷凍6-24h優選12h，再置于凍干機中冷凍干燥。

6.一種用于保護血細胞的中藥提取物，所述中藥提取物是通過權利要求1-5中任一項所述的方法制備得到的。

7.如權利要求1-5中任一項所述的方法或如權利要求6所述的中藥提取物在制備細胞凍存保護劑中的用途。

8.一種用于保護凍存血細胞的保護方法，所述保護方法包括向血細胞凍存溶液添加如權利要求6所述的中藥提取物和氫氣。

9.如權利要求8所述的保護方法，所述保護方法包括如下步驟：

(i)在所述血細胞凍存溶液中添加如權利要求6所述的中藥提取物，形成第四混合物；

(ii)取血液，加入抗凝劑，稀釋到目的濃度，形成第一冷凍血液混合物；

(iii)將所述第四混合物加入所述第一冷凍血液混合物，形成第二冷凍血液混合物；

(iv)向所述第二冷凍血液混合物中通入氫氣，形成第三冷凍血液混合物，對所述第三冷凍血液混合物進行冷凍儲存。

10.如權利要求9所述的保護方法，其特征在于：

所述血細胞凍存溶液的成分為：按照體積比5-15％DMSO、60-80％DMEM、5-15％FBS，且總體積為100％，優選10％DMSO、70％DMEM、20％FBS；和/或

在步驟(i)中，以所述血細胞凍存溶液為溶劑，所述中藥提取物的濃度為：1-15mg/L，優選2-10mg/L，更優選6mg/L；和/或

所述抗凝劑為肝素；和/或

在步驟(ii)中，采用的pH＝6.9的PBS緩沖液稀釋所述血液，可選，稀釋20-50倍體積，優選稀釋40倍體積；和/或

在步驟(iii)中，所述第四混合物以1:2-10優選1:5的體積比加入所述第一冷凍血液混合物；和/或

在步驟(iv)中，向所述第二冷凍血液混合物中通入氫氣的步驟為：將氫氣緩慢的通入所述第二冷凍血液混合物中，持續3-10min，優選5min，優選通入氫氣的速度為0.04-0.06L/min，更優選0.05L/min。