[發明專利]一組與結締組織生長因子特異性結合的高親和力核酸適配體及其應用

有效

• 申請號: 201811149695.4
• 申請日: 2018-09-29
• 公開（公告）號: CN109402127B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 高順祥;吳繼紅
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫院
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/68;A61K47/26;A61K31/7088;A61P35/00;A61P3/10;A61P13/12;A61P9/10;A61P29/00;A61P19/02;A61P9/00;A61P43/00;A61P19/00
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 龔敏

本發明涉及眼科學和生物技術領域，具體是一組與結締組織生長因子(CTGF)特異性結合的高親和力核酸適配體。本發明是基于SELEX技術篩選得到的一條特異性識別CTGF的高親和力核酸適配體，并通過突變、截短和鎖核酸替代等一系列的優化策略進一步改善核酸適配體的性能。所述的該組核酸適配體具有廣闊的應用前景，可用于復雜體系中CTGF的捕獲、體內外CTGF的檢測以及在相關疾病中CTGF治療藥物的開發和靶向給藥系統的構建等。本發明的核酸適配體面向實際應用具有巨大的潛力。

技術領域

本發明涉及眼科學和生物技術領域，具體地說，是一組與結締組織生長因子(CTGF)特異性結合的高親和力核酸適配體及其應用。

背景技術

結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年來新發現的一種細胞因子，是高度保守的CCN家族成員之一。CTGF在人類多種組織器官中廣泛表達，其在促進細胞增殖、刺激細胞遷移、介導細胞粘附、血管生成、軟骨形成、骨骼發育、腫瘤的發生發展、組織修復和器官纖維化等生理和病理活動中發揮著非常重要的生物學功能。CTGF的表達水平與許多疾病相關，現已經成為多種疾病重要的診斷和治療靶點。因此，迫切需要發展特異性識別CTGF的配體分子，從而為臨床疾病中CTGF診斷試劑的制備、中和藥物的開發和靶向給藥系統的構建奠定基礎，以及為基礎研究中CTGF的捕獲、富集和純化提供有效的工具。

核酸適配體作為一種新型的生物識別分子，能夠高特異識別并結合靶分子。它是通過指數富集性配體系統進化技術(Systematic Evolution of Ligands by ExponentialEnrichment,SELEX)從體外構建的隨機核酸文庫中篩選獲得的ssDNA或者RNA分子。核酸適配體由于可化學合成、易于標記和修飾、識別靶標廣泛、不受免疫原性和免疫條件的限制、高親和力和強特異性等優點，可用于特定靶分子的分離、檢測、活體內傳遞、中和藥物開發等，在分析診斷和醫藥研究等領域中具有廣闊的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供一組與CTGF特異性結合的高親和力核酸適配體。本發明的另一目的是提供該組核酸適配體在制備CTGF檢測試劑、試劑盒或傳感器中；在制備CTGF捕獲、富集和純化的制劑中；在制備CTGF相關臨床疾病的診斷試劑、靶向傳遞系統、中和或阻斷藥物中等多方面的應用。

本發明通過SELEX技術篩選得到了與CTGF特異性結合的高親和力核酸適配體，并通過突變、截短和鎖核酸替代等一系列的優化策略進一步改善核酸適配體的親和力、特異性、結構穩定性等性能，為復雜體系中CTGF的捕獲和體內外CTGF檢測試劑的制備及相關疾病中CTGF靶向給藥系統構建和治療藥物的開發提供了一組特異性強、穩定性高、易于制備和修飾的高親和力的生物識別分子。

本發明的主要技術方案是：1)通過磁珠SELEX技術篩選獲得了一條與CTGF特異性結合的高親和力核酸適配體；2)通過突變優化提高了該核酸適配體的親和力；3)通過截短優化獲得了該核酸適配體的核心序列，并進一步提高了其靶向親和力；4)通過鎖核酸替代顯著改善了該核酸適配體的結構穩定性等。為CTGF相關的實驗室技術的開發、臨床診斷方法的發展和核酸藥物的挖掘提供了有效的工具。

本發明的第一方面，提供了一組與CTGF特異性結合的高親和力核酸適配體，其序列分別如SEQ ID No.1～SEQ ID No.11(表1)所示。

表1

本發明的第二方面，提供一組如上所述的核酸適配體在制備CTGF檢測試劑、試劑盒或傳感器中的應用。

進一步的，所述的試劑、試劑盒或傳感器可用于快速檢測體內外的CTGF。

本發明的第三方面，提供了一組如上所述的核酸適配體在制備CTGF捕獲、富集和純化制劑中的應用。