[發明專利]一種L-天冬氨酸的質控生產方法及其應用

在審

• 申請號: 201811148809.3
• 申請日: 2018-09-29
• 公開（公告）號: CN109337941A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 徐禮生;張興桃;陳紅玲;高貴珍;趙亮;蘇博;段騰飛
• 申請（專利權）人: 宿州學院
• 主分類號: C12P13/20
• 分類號: C12P13/20;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙) 34124
• 代理人: 蘇園園

1.一種L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，包括L-天冬氨酸發酵液的制備以及L-天冬氨酸發酵液的含量檢測；

所述L-天冬氨酸發酵液的制備方法包括以下步驟：

S1、將具有L-天冬氨酸酶活性的菌株在培養基中培養發酵，離心后得到含L-天冬氨酸酶的濕菌體；

S2、將濕菌體加入轉化液中，于35～50℃條件下進行酶促反應后，得到L-天冬氨酸的發酵液；

所述L-天冬氨酸發酵液的含量檢測方法如下：

步驟一：取4-6ml L-天冬氨酸的標準溶液和2-4ml的茚三酮顯色劑溶液在室溫下進行反應，6-8ml茚三酮溶液作為空白對照，將L-天冬氨酸的標準溶液和空白對照在400-600nm波長下進行掃描，通過掃描結果確定最大吸收波長；

步驟二：標準曲線的制作；

步驟三：樣品中L-天冬氨酸的含量確定：將發酵液稀釋至0.1-1mg/ml后，取發酵液4mL，加入2ml的茚三酮顯色劑溶液在室溫下進行反應，6ml茚三酮溶液作為空白對照，在最大吸收波長處測定其吸光度值，將吸光度值代入線性回歸方程計算樣品中L-天冬氨酸的含量。

2.根據權利要求1所述L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述步驟二中標準曲線的制作方法如下：

配制不同濃度梯度的L-天冬氨酸標準溶液，L-天冬氨酸標準溶液濃度梯度為：0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1.0mg/ml；分別取上述標準溶液4-6ml加入10ml的試管中，然后往試管里再加入2-4ml茚三酮顯色劑進行顯示反應，在最大吸收波長處測定濃度不同的L-天冬氨酸的標準溶液的吸光度值，根據測定的結果制作標準曲線；

線性回歸方程為：Y＝0.0678X+0.0135，R²＝0.9995，其中Y為吸光度值，X為L-天冬氨酸濃度。

3.根據權利要求1所述L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述轉化液中含有32-38％的富馬酸，余量為水，采用氨水調轉化液的pH至6～11。

4.根據權利要求3所述L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述轉化液中含有35％的富馬酸，余量為水，采用氨水調轉化液的pH至7.5。

5.根據權利要求1所述L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述步驟一和步驟三中茚三酮溶液的質量濃度為1.5％。

6.根據權利要求1所述的L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述所述步驟一中L-天冬氨酸的標準溶液采用1cm比色皿測定待測樣品溶液，確定L-天冬氨酸的標準溶液的最大吸收波長為510nm。

7.根據權利要求1所述L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述步驟一中取4ml2.5mg/ml的L-天冬氨酸作為標準溶液。

8.根據權利要求1所述L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述步驟一中取4ml2.5mg/ml的L-天冬氨酸作為標準溶液。

9.根據權利要求1所述L-天冬氨酸的質控生產方法，其特征在于，所述步驟二中分別取上述標準溶液4ml加入10ml的試管中，然后往試管里再加入2ml茚三酮顯色劑進行顯示反應。

10.一種采用如權利要求1-9任一所述的L-天冬氨酸的質控生產方法，在工業化生產L-天冬氨酸中的應用。