[發明專利]重組人溶菌酶的新應用

有效

• 申請號: 201811140925.0
• 申請日: 2018-09-28
• 公開（公告）號: CN109022351B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 張華;李亞男;林穎;陳達凱;程聰偉;楊創欽;陳禹興;李月俏;鄭金麗;鄧遠倪;連培榮;龍志東;黃金銳;梁佳潮
• 申請（專利權）人: 廣州奇龍生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K38/47;A61K31/522;A61P31/22
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張春水;唐京橋

本發明屬于生物醫藥的技術領域，尤其涉及重組人溶菌酶的新應用。本發明提供了重組人溶菌酶在體外宿主細胞培養中抑制單純皰疹病毒II型感染的應用。本發明發現重組人溶菌酶在體外宿主細胞培養中對單純皰疹病毒II型感染有抑制作用，并且抗HSV?2作用呈現量效關系。

技術領域

本發明屬于生物醫藥的技術領域，尤其涉及重組人溶菌酶的新應用。

背景技術

單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus，HSV)屬于人類皰疹病毒α亞科，是DNA雙鏈病毒，人類是其唯一自然宿主。根據其抗原性質的不同，可分為單純皰疹病毒I型(HSV-1型)型和單純皰疹病毒II型(HSV-2型)，兩者之間的基因同源序列約為50％。HSV-1型多感染口、面、眼等腰部以上部位，而HSV-2型則通常感染生殖器及肛周等腰以下部位。皰疹的典型臨床表現出皮膚粘膜上出現集簇性水皰、膿皰、潰瘍和結痂。

由于缺乏有效的病毒疫苗，藥物治療成為HSV病毒感染的主要治療途徑。目前臨床應用核苷類藥物作為抗HSV病毒的主要藥物，但該類藥物主要適用于病毒復制的原發性和復發性感染，對潛伏感染則難以奏效。早起的核苷類藥物包括碘脫氧尿鋪、阿糖腺苷、三夫腺苷，其選擇性低，對正常細胞毒性較大。目前廣泛使用的是以阿昔洛韋為代表的無環鳥苷類藥物，包括阿昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋等。

其中，核苷類藥物作為治療HSV病毒感染的主要手段，存在兩個主要問題：1、部分核苷類藥物如碘脫氧鳥苷、阿糖腺苷、更昔洛韋等為誘變劑，導致其使用安全性較低；2、耐藥株的出現增加了HSV感染治療的困難。如使用無環鳥苷類藥物時，當HSV的胸苷激酶或DNA聚合酶發生突變時，病毒即可產生耐藥能力。由于臨床用核苷類藥物基本都作用于病毒胸苷激酶或DNA聚合酶相同位點，對一種核苷類藥物產生耐藥的病毒株往往對其他核苷類藥物同樣具有耐藥性，因而使得HSV感染的治療更加困難。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于公開了一種安全性強的，治療單純皰疹病毒II型感染的藥物。

本發明提供了重組人溶菌酶在體外宿主細胞培養中抑制單純皰疹病毒II型感染的應用。

需要說明的是，溶菌酶(Lysozyme，EC3.2.1.17)又稱細胞壁質酶(Murami dase)或N-乙酰胞壁質聚糖水解酶(N-Acetyl muramide Glycanohydralase)。1922年英國細菌學家A.Fleming發現人的唾液、眼淚中存在有溶解細菌細胞壁的酶，人溶菌酶由130個氨基酸殘基組成，有4個S-S鍵，分子量為14700，等電點為10.1—10.3，最適溫度為50℃，最適pH值為6～7，其化學性質非常穩定，在pH1.2～11.3范圍內劇烈變化時，結構仍穩定不變。遇熱也很穩定，在pH4～7、100℃處理1min不失活，是一種穩定的堿性蛋白質，但在堿性條件下對熱穩定性較差。人溶菌酶存在于眼淚、唾液、鼻粘液、乳汁等分泌液以及淋巴腺、白血球、肝、腎、淋巴組織中。

作為優選，所述應用包括以下步驟：

步驟1、在體外將宿主細胞與重組人溶菌酶混合培養后，除去重組人溶菌酶得到預處理宿主細胞；

步驟2、將單純皰疹病毒II型感染所述預處理宿主細胞，所述重組人溶菌酶在體外宿主細胞培養中對單純皰疹病毒II型感染的抑制作用。

本發明還意外發現，預先將宿主細胞與重組人溶菌酶混合培養一段時間后，除去重組人溶菌酶后，宿主細胞具有很好的抑制單純皰疹病毒II型感染的作用。

作為優選，所述重組人溶菌酶選自人溶菌酶、重組人溶菌酶的N端氨基帶有(谷氨酸-丙氨酸)2、以及重組人溶菌酶的N端氨基帶有(谷氨酸-丙氨酸)3修飾的重組人溶菌酶中的一種或多種。

作為優選，所述宿主細胞為HEK293細胞。

其中，所述人溶菌酶為天然存在的人溶菌酶。