[發明專利]一種斑馬魚保種培養方法

有效

• 申請號: 201811140901.5
• 申請日: 2018-09-28
• 公開（公告）號: CN109220912B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 杜青平;劉濤;劉倩;李嘉懿;彭皇強;秦春怡;林俊熙
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: A01K61/17
• 分類號: A01K61/17;A01G33/00;A01K67/033
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張春水;唐京橋

本發明屬于保種培養技術領域，尤其涉及一種斑馬魚保種培養方法。本發明斑馬魚保種培養方法中，建立了一個有益菌?綠藻?草履蟲?斑馬魚食物鏈式單缸水生生態培養系統，讓斑馬魚胚胎在該生態系統中穩定孵化和生長，除在透光容器補充蒸發的水分外，無需添加額外的飼料，無須人工維持水中的pH、溶解氧等條件，操作簡單，經濟有效，且使斑馬魚胚胎能夠穩定孵化和生長至成魚期，斑馬魚幼魚生長至成魚期，可穩定獲得大量斑馬魚成魚，省去一般培養中對環境系統條件的控制，減少了大量的時間，且達到了實驗室保種和獲得大量同親代斑馬魚成魚的目的。

技術領域

本發明屬于保種培養技術領域，尤其涉及一種斑馬魚保種培養方法。

背景技術

斑馬魚是一種小型熱帶淡水魚，其基因與人類基因相似度達到87％，并作為胚胎發育生物學和遺傳學的實驗動物模型被廣泛地運用于早期胚胎發育基因表達控制的研究。斑馬魚和人類基因有著87％的高度同源性，作為模式生物的優勢很突出，其實驗結果大多數情況下適用于人體，常可用于水質環境的監測。

成熟的斑馬魚每隔幾天可產卵一次，卵子體外受精，體外發育，胚胎發育速度快，胚胎透明。發育溫度要求在25℃～31℃之間。雌魚每次產卵200-300枚，到達繁殖期，可連續產卵幾周。胚胎在24小時內就可發育成形，這使得生物學家可以在同一代魚身上進行不同的實驗，進而研究病理演化過程并找到病因。

斑馬魚從胚胎發育至成魚需要經歷4個時期：胚胎期(0-4dpf)，幼苗期(5-15dpf)，幼魚期(16-90dpf)，成魚期(90dpf)。斑馬魚在胚胎期不需要喂食，經過胚胎期后需要喂食，幼苗期每日需人工投喂開口料2-3次。但是，斑馬魚在成魚期的人工養殖過程較為繁瑣，且人工換水等操作易造成斑馬魚幼魚損傷。

發明內容

本發明提供了一種斑馬魚幼魚保種培養方法，用于解決斑馬魚在成魚期的人工養殖過程較為繁瑣，且人工換水等操作易造成斑馬魚損傷的問題。

具體方案如下：

一種斑馬魚保種培養方法，包括以下步驟：

a)在裝有滅菌水的透光容器內接種綠藻并進行曝氣增氧；

b)在所述透光容器內接種草履蟲，加入有益菌后接種斑馬魚幼魚，投入斑馬魚胚胎；

其中，所述透光容器光暗比為10～14：10～14的環境下，在預置時間對所述透光容器進行滅菌水的補充。

本發明斑馬魚保種培養方法中，建立了一個有益菌-綠藻-草履蟲-斑馬魚食物鏈式單缸水生生態培養系統，孵化后的斑馬魚胚胎絨毛膜和斑馬魚幼魚的排泄物在透光容器底部形成有機物，經過有益菌的降解，為綠藻的生長提供了N、P等營養物質，促進綠藻生長繁殖。綠藻-草履蟲-斑馬魚為捕食關系，而有益菌降解有機物可保持綠藻生長所必須的營養元素，草履蟲數量增多，斑馬魚捕食草履蟲使草履蟲數量維持穩定，通過人工控制斑馬魚幼魚數量，防止斑馬魚過度捕食草履蟲，同時草履蟲和斑馬魚所產生的有機排泄物被有益降解，綠藻可在底部形成植被，維持水生生態培養系統中所需要的氧氣，可使溶解氧維持在6mg/L以上，菌-藻-草履蟲-斑馬魚可以維持一個相對平衡的水生生態系統，模擬出自然生態系統，使其具有循環性和穩定性。水生生態培養系統讓斑馬魚胚胎穩定孵化和生長，除在透光容器補充蒸發的水分外，無需添加額外的飼料，無須人工維持水中的pH、溶解氧等條件，操作簡單，經濟有效，且使斑馬魚胚胎能夠穩定孵化和生長至成魚期，斑馬魚幼魚生長至成魚期，可穩定獲得大量斑馬魚成魚，省去一般培養中對環境系統條件的控制，減少了大量的時間，且達到了實驗室保種和獲得大量同親代斑馬魚成魚的目的。

斑馬魚每次可以產卵200～300顆，壞死的胚胎可能會影響到健康胚胎，在現有的斑馬魚胚胎培養中，需要將成功受精的健康胚胎與壞死的胚胎進行分離，分離工作繁瑣，而采用本發明斑馬魚保種培養方法，壞死的胚胎會被水生生態培養系統中的有益菌分解，不需進行分離步驟，大大節約了人力，并且有益菌分解壞死的胚胎可作為有機物的補充。