[發明專利]保存液及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201811137122.X
• 申請日: 2018-09-27
• 公開（公告）號: CN109090104A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 賴曉冬;鄧昕
• 申請（專利權）人: 廣州新誠生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 齊云

本發明提供了一種細胞保存液及其制備方法和應用、細胞保存方法，屬于細胞保存液技術領域。本發明提供了一種細胞保存液，所述細胞保存液包括細胞保護劑、核酸酶抑制劑、螯合穩定劑和新陳代謝抑制劑。本發明細胞保存液通過細胞保護劑、核酸酶抑制劑、螯合穩定劑和新陳代謝抑制劑這四種成分的協同作用，得到的細胞保存液能夠在常溫下長時間有效保存CTC細胞，能夠有效保護CTC細胞的形態和抗原表態，允許長距離運輸，可提高CTC分析檢測的重復性和可靠性。

技術領域

本發明屬于細胞保存液技術領域，具體涉及一種細胞保存液及其制備方法和應用、細胞保存方法。

背景技術

循環腫瘤細胞(circulating tumor cell)簡稱CTC，CTC是游離于患者血液中的腫瘤細胞，攜帶了腫瘤的全部基因，可以作為基因檢測的樣本。循環腫瘤細胞的檢測可有效地應用于體外早期診斷，化療藥物的快速評估，能實時反映腫瘤的基因狀況，清楚地指導患者下一步的藥物選擇，提高治療效果，個體化治療包括臨床篩藥、耐藥性的檢測，腫瘤復發的監測以及腫瘤新藥物的開發等。

然而，現有的細胞保存液還存在一些問題，如需要低溫保存，但低溫保存對樣品的穩定性及運輸條件都提出了更高要求，或者在常溫下無法長時間保存，使得收集的CTC細胞在數小時內易破碎降解，不能有效保護CTC的形態和抗原表態，無法保證CTC分析檢測的重復性和可靠性，不利于后續分析檢測。

因此，所期望的是提供一種能夠在常溫下長時間有效保存CTC細胞的細胞保存液，能夠解決上述問題中的至少一個。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種細胞保存液；該細胞保存液能夠在常溫下長時間有效保存CTC細胞，能夠有效保護CTC細胞的形態和抗原表態，允許長距離運輸，可提高CTC分析檢測的重復性和可靠性。

本發明的第二個目的在于提供上述細胞保存液的制備方法。

本發明的第三個目的在于提供上述細胞保存液在細胞保存中的應用。

本發明的第四個目的在于提供一種細胞保存方法；該細胞保存方法可以在常溫下長時間有效保存CTC細胞，能夠有效保護CTC細胞的形態和抗原表態，允許長距離運輸，可提高CTC分析檢測的重復性和可靠性。

根據本發明第一個方面，提供了一種細胞保存液，所述細胞保存液包括細胞保護劑、核酸酶抑制劑、螯合穩定劑和新陳代謝抑制劑。

作為進一步優選的技術方案，所述細胞保護劑為尿囊素、5,5-二甲基海因和噁唑烷中的至少一種；

優選地，所述核酸酶抑制劑為含脂肪族甲亞胺基的席夫堿、含脂肪族甲亞胺基的席夫堿的二聚物和含脂肪族甲亞胺基的席夫堿三聚物中的至少一種；

優選地，所述含脂肪族甲亞胺基的席夫堿為N-乙酸甲亞胺和N-(3-乙酸-戊胺)甲亞胺中的至少一種。

作為進一步優選的技術方案，所述螯合穩定劑為鈣離子螯合劑，優選為乙二胺四乙酸鹽、草酸鹽、肝素鹽和枸櫞酸鹽中的至少一種。

作為進一步優選的技術方案，所述新陳代謝抑制劑為金精三羧酸、甘油醛、二硫蘇糖醇、氟化鈉、磷酸二羥丙酮、3-磷酸甘油醛、1,3-雙磷酸甘油酸、3-磷酸甘油酸、2-磷酸甘油酸、磷酸甘油酸、磷酸烯醇丙酮酸、丙酮酸、甘油酸二羥基乙酸酯和草酸鉀中的至少一種。

作為進一步優選的技術方案，所述細胞保存液還包括酸堿緩沖液；

優選地，所述酸堿緩沖液為甘氨酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液、檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液和三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液中的至少一種；

優選地，所述細胞保存液的pH值為3.0～8.0，優選為6.0～8.0。