[發明專利]抗海蛇神經毒素SN160的納米抗體、制備方法及用途

有效

• 申請號: 201811131111.0
• 申請日: 2018-09-27
• 公開（公告）號: CN109336972B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 胡適;劉爍吾;傅文燕;雷長海;李天
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;C12N15/63;A61K39/395;A61P39/02
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

本發明涉及生物醫藥技術領域，提供了一種抗海蛇神經毒素SN160的納米抗體、制備方法及應用，該抗海蛇神經毒素SN160的納米抗體為VHH抗體，具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，編碼該納米抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，通過親和力分析本發明的納米抗體具有良好的親和力，通過小動物實驗證明，預先注射本發明納米抗體的抗體保護組小鼠在注射海蛇神經毒素SN160后，無任何小鼠出現神經中毒癥狀，連續觀察一個月無毒素致死情況，說明本發明的納米抗體具有優良的抗海蛇毒素的作用，對海蛇咬傷具有優良的預防或治療作用，具備廣闊的臨床應用前景。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種抗海蛇神經毒素SN160的納米抗體、其制備方法和用途，尤其是在制備海蛇抗毒制劑以及在治療或預防海蛇咬傷方面的用途。

背景技術

自進入新時代以來，我國海洋事業不斷推進，養殖捕撈、海洋資源利用與研究等發展迅速；并且作為海洋大國，我國要建設世界一流海軍，也需要不斷加強海軍建設。然而在沿海海域存在的有毒有害的海洋生物，會對生產作業的漁民、海洋資源開發者、研究員和海軍戰士等存在潛在威脅。因此海洋生物傷的防治研究工作對于人民的生產、科學研究、部隊訓練的衛勤保障和醫療工作有重大意義，所以必須盡快著手開展抗海洋生物傷的科學應用研究。

平頦海蛇是一種典型的有毒海洋生物，屬眼鏡蛇科，俗名棘海蛇，平頦海蛇咬傷事件時常發生。目前對海蛇咬傷的治療措施主要為排出毒液、減少毒液吸收和抗毒治療等。雖然最有效的急救治療措施是盡早注射特種抗毒血清或抗體藥物等抗毒制劑，但目前特種抗毒血清等抗毒制劑主要來源于免疫動物，而直接使用蛇毒毒素免疫動物的方法來獲得抗毒血清或篩選多/單克隆抗體的方法具有許多缺點：一是海蛇捕捉困難，難以獲得大量的天然海蛇毒素進行動物免疫，從毒腺中分離神經毒素遠不能滿足制備抗毒制劑的需要。二是由于蛇毒毒素對動物具有致死性，因此需要進行減毒處理，而減毒毒素往往會丟失其抗原性及表位，導致利用減毒毒素制備的抗毒素中和活性減弱。三是動物來源的抗毒血清等制品容易引起患者強烈的過敏反應，甚至死亡。因此，海蛇毒素的抗毒血清制備困難且質量不穩定，世界上僅有少數國家能常備有海蛇抗毒制劑。

隨著分子生物學的發展，采用基因工程的方法制備蛇毒毒素的技術已經成熟，能夠開展蛇毒毒素的生物合成及并在此基礎上進行抗蛇毒抗體的制備研究。前期本團隊已經利用基因工程方法完成了三種海蛇神經毒素的重組表達。獲得了大量海蛇毒素，使篩選針對毒素的特異性抗體藥物成為可能。

由于抗體能夠高效、特異地與體內和體外的各種抗原蛋白結合，使得抗體不僅能應用于調節免疫系統功能，還可以應用于各種高靈敏的檢測方法。目前，抗體藥物是生物技術藥物最重要的組成部分，抗體試劑也是醫學診斷和生物學研究中最常用到的試劑之一。因此，抗體相關的生物產品具有極高的應用前景和商業價值。抗體可以通過多種途徑獲得，例如：動物或人的血液、細胞培養、注射雜交瘤細胞的鼠的腹水等，但這均需要有效的方法進行純化，以獲得具有應用價值的抗體產品。目前最常用的抗體純化方法是利用特殊蛋白質與抗體的Fc片段之間的高親和力進行親和層析。在進行抗體產品的工業生產的過程中親和層析是其中最為關鍵的一步，也是整個生產中耗費最高的部分。

針對上述問題，納米抗體應運而生，納米抗體是來源于駱駝科動物或軟骨魚的特殊抗體。研究表明，駱駝體內存在一種天然缺失輕鏈只含重鏈的抗體，稱為重鏈抗體。克隆重鏈抗體的可變區可得到只由一個重鏈可變區組成的單域抗體，稱為VHH抗體。VHH抗體的晶體直徑僅有2.5nm，長4nm，因此又被稱為納米抗體。納米抗體的大小只有傳統IgG型抗體的十分之一，是天然存在的可與抗原結合的最小片段。納米抗體能被單基因編碼，可以很容易的利用微生物進行生產，并具有很高的產率。但目前尚未見針對海蛇神經毒素SN160的納米抗體的相關報道。

發明內容

本發明的目的在于，依托上述研究背景，研究抗海蛇神經毒素SN160的納米抗體、制備方法和用途，即提供了一種抗海蛇神經毒素SN160的納米抗體、其制備方法和用途。