[發(fā)明專利]一種結(jié)縷草的誘導(dǎo)愈傷組織的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811129611.0
• 申請(qǐng)日: 2018-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN109156349A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方敏彥;章明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷麗

本發(fā)明公開了一種結(jié)縷草的誘導(dǎo)愈傷組織的方法。方法包括：將結(jié)縷草的莖尖外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；通過(guò)暗培養(yǎng)的方式，其中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+2,4?D 2.0?3.0mg/L+6?BA0.05?0.1mg/L。本發(fā)明的外植體選用數(shù)量大且易采集的莖尖，通過(guò)適宜的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及光照條件使愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)90％以上，遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)(愈傷組織誘導(dǎo)率僅為56.8％)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)，尤其涉及一種結(jié)縷草的誘導(dǎo)愈傷組織的方法。

背景技術(shù)

結(jié)縷草屬植物是禾本科畫眉草亞科多年生草本植物，具備適應(yīng)性強(qiáng)、植株密度大、覆蓋地面能力強(qiáng)、耐旱、耐修剪踐踏、再生恢復(fù)能力強(qiáng)，常用作于草坪草、生態(tài)治理、保持水土、凈化水源，是優(yōu)良的生態(tài)環(huán)保型草坪草，應(yīng)用逐漸廣泛。目前使用主要存在兩類問(wèn)題：1、生長(zhǎng)速度較慢，常規(guī)的有性及無(wú)性繁殖方法無(wú)法滿足日益增長(zhǎng)的大量需求。2、現(xiàn)有可用品種較單一，優(yōu)良新品種急待選育，以適應(yīng)更廣泛的區(qū)域。

通過(guò)組織培養(yǎng)手段可進(jìn)行人工擴(kuò)繁增大其繁殖再生系數(shù)，此外，體細(xì)胞胚(體胚)變異具有特殊的科學(xué)價(jià)值，獲得優(yōu)新種質(zhì)的年限短，該技術(shù)尤其為獲得純系年限長(zhǎng)、有性雜交困難、無(wú)性繁殖為主的結(jié)縷草屬植物種質(zhì)資源創(chuàng)新提供了新的途徑。組織培養(yǎng)植株再生過(guò)程中愈傷組織誘導(dǎo)是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，體胚誘變種質(zhì)創(chuàng)新中單個(gè)體細(xì)胞的形成也依賴于愈傷組織的形成。

目前，雖然已有相關(guān)研究開展了結(jié)縷草屬植物愈傷組織形成的研究，但已有方法如外植體采集不當(dāng)(如利用莖基進(jìn)行誘導(dǎo)，在葉片剝離過(guò)程中莖基極易受損)或數(shù)量少(如利用匍匐莖進(jìn)行誘導(dǎo)，匍匐莖生長(zhǎng)數(shù)量有限且采集困難)愈傷組織誘導(dǎo)基數(shù)低。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供提升誘導(dǎo)率的結(jié)縷草的誘導(dǎo)愈傷組織的方法。

技術(shù)方案：

一種結(jié)縷草的誘導(dǎo)愈傷組織的方法，包括：將結(jié)縷草的莖尖外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；其中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+2,4-D 2.0-3.0mg/L+6-BA0.05-0.1mg/L。

優(yōu)選，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+2,4-D 2.5-3.0mg/L+6-BA0.05-0.1mg/L。

所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.8～6.0。

所述外植體的獲得方法包括：結(jié)縷草生長(zhǎng)季5-9月，選擇長(zhǎng)勢(shì)良好，無(wú)病害的結(jié)縷草植株，將直立莖頂端2-4cm莖段采下，將所帶葉片由上至下剝離。

接種前，將外植體進(jìn)行消毒處理。

所述消毒處理的方法包括：將外植體先用升汞浸泡30s，再用無(wú)菌水消毒3-4次，然后再用酒精浸泡5min，最后再用無(wú)菌水沖洗3-4次。消毒后將外植體放在無(wú)菌紙上降溫，待溫度適宜35-40℃之后剪成適當(dāng)?shù)拈L(zhǎng)度2-3cm開始接種。

所述培養(yǎng)為暗培養(yǎng)。

所述暗培養(yǎng)的條件，溫度:白天(25±1)℃，夜晚(18±1)℃；濕度：65％～75％。所述白天的時(shí)間為10～12h，所述夜晚的時(shí)間為10～12h。

所述結(jié)縷草為溝葉結(jié)縷草、細(xì)葉結(jié)縷草、中華結(jié)縷草或青島結(jié)縷草。

有益效果：

本發(fā)明的外植體選用數(shù)量大且易采集的莖尖，通過(guò)適宜的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及光照條件使愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)90％以上，遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)(愈傷組織誘導(dǎo)率僅為56.8％)

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例3暗培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的結(jié)果；

圖2為實(shí)施例3光照條件下培養(yǎng)的結(jié)果。

具體實(shí)施方式