[發(fā)明專利]基因工程菌菌種凍干保藏的保護(hù)劑及其保藏方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811128966.8
• 申請日: 2018-09-27
• 公開（公告）號: CN109055227B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 涂桂洪;王曙聘;潘忠林;譚志康;祝廷霞
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市金因源生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 林德強(qiáng)

1.一種用于基因工程菌菌種凍干保藏的保護(hù)劑，其特征在于，含量以重量百分?jǐn)?shù)計(jì)，其組成包括以下成分：菌種發(fā)酵物56%～64%，甘露醇1.8%～2.6%，人血清白蛋白0.25%～0.36%，余量為去離子水；

其中，所述基因工程菌為感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)導(dǎo)入重組質(zhì)粒并成功表達(dá) EGF 蛋白得到；

所述感受態(tài)細(xì)胞為大腸桿菌 BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞；

所述重組質(zhì)粒為含有編碼 EGF 蛋白的序列；

所述菌種發(fā)酵物為產(chǎn)業(yè)上收割完銀耳子實(shí)體后剩余的栽培物經(jīng)過烘干、粉碎后制得的細(xì)粉，或者，為培養(yǎng)物經(jīng)過香灰菌發(fā)酵培養(yǎng)后進(jìn)行烘干、粉碎后制得的細(xì)粉；

所述培養(yǎng)物的組成及其以重量百分?jǐn)?shù)計(jì)的含量為棉籽殼45%、麩皮28%、大豆粉13%、石膏1.6%，余量為水；

所述菌種發(fā)酵物為產(chǎn)業(yè)上收割完銀耳子實(shí)體后剩余的栽培物經(jīng)過烘干、粉碎后制得的細(xì)粉時(shí)，烘干過程是在60～70℃下于恒溫干燥箱內(nèi)烘干至無水狀態(tài)，粉碎過程將所述栽培物粉碎至顆粒均可通過120～180目篩，即顆粒粒徑為80微米～120微米；

所述菌種發(fā)酵物為培養(yǎng)物經(jīng)過香灰菌發(fā)酵培養(yǎng)后進(jìn)行烘干、粉碎后制得的細(xì)粉時(shí)，是將香灰菌按培養(yǎng)物重量的0.4%～1.8%接種到培養(yǎng)物上，設(shè)置培養(yǎng)溫度為22℃～28℃，發(fā)酵7～11天，收獲香灰菌的菌種發(fā)酵物；然后在60～70℃下于恒溫干燥箱內(nèi)烘干至無水狀態(tài)，粉碎過程將所述經(jīng)過香灰菌發(fā)酵后的培養(yǎng)物粉碎至顆粒均可通過120～180目篩，即顆粒粒徑為80微米～120微米。

2.一種基因工程菌菌種凍干保藏的方法，其特征在于，包括以下步驟：首先，使用LB培養(yǎng)基對基因工程菌進(jìn)行洗滌和重懸，制成含有數(shù)量級為10⁷～10⁹ CFU/mL濃度的基因工程菌的懸浮液；然后，將上述基因工程菌的菌懸液分裝于無菌西林瓶中，再加入權(quán)利要求1所述的用于基因工程菌菌種凍干保藏的保護(hù)劑，保護(hù)劑用量為菌懸液體積的58%～84%，充分混合均勻后凍干，凍干結(jié)束后將凍干成品保存于10℃干燥環(huán)境下；

所述基因工程菌為感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)導(dǎo)入重組質(zhì)粒并成功表達(dá) EGF 蛋白得到；所述感受態(tài)細(xì)胞為大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞；所述重組質(zhì)粒為含有編碼EGF蛋白的序列。