[發明專利]一種便捷穩定的同型半胱氨酸檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201811121753.2
• 申請日: 2018-09-26
• 公開（公告）號: CN109212232B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 楊帆;唐玉蓉;高洪元;李濱雁;宋金玲;劉美雪;呂萌萌
• 申請（專利權）人: 青島漢唐生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種便捷穩定的同型半胱氨酸檢測試劑盒及檢測方法，試劑盒包括試劑R1、試劑R2和HCY液體校準液，所述試劑R1包含緩沖液、還原劑、絲氨酸、輔酶防腐劑、表面活性劑，所述試劑R2包含緩沖液、表面活性劑、乳酸脫氫酶、穩定劑、抗氧化劑、防腐劑、胱硫醚β?合成酶、胱硫醚β?裂解酶，所述HCY液體校準液包含穩定劑、防腐劑、同型半胱氨酸。本發明通過在試劑盒中加入抗氧化劑，多方面的抑制了酶在各個干擾因素下的衰減，有效的提高了試劑盒在特殊環境下和效期保存中的穩定性。

技術領域

本發明屬于醫學體外診斷試劑領域，具體涉及到一種便捷穩定的同型半胱氨酸檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

血同型半胱氨酸(HCY)是卒中等心腦血管病的的危險因素，它的水平明顯升高，可診斷“高同型半胱氨酸血癥”，尤其還伴有高血壓病史。許多學者認為血同型半胱氨酸升高已經成為動脈粥樣硬化發生的一個獨立危險因子，并可引發多種疾病，因為它可影響還原型谷胱甘肽的合成與功能，對正常肝臟功能產生負面作用，這個指標對診斷慢性肝病的特異性和敏感性較常規檢測好；另有一個新理念為，伴有血漿HCY升高(＞10umol/L)的原發性高血壓定義為H型高血壓。

在我國各大醫院均有對同型半胱氨酸的檢測，可見已十分普及，在現有的技術下，有關HCY的實驗室檢測方法分別有以下幾種：

1、同位素法，該方法通過14C標記的腺苷與HCY縮合后，經色譜分離，液體閃爍計數放射強度來測HCY濃度。該方法靈敏度高，特異性強，但操作繁瑣且有放射污染，未能推廣使用。

2、色譜法，1987年Stabler首先報道了氣相色譜―質譜法測定同型半胱氨酸。該法可同時測定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和甲基甘氨酸等多種物質。雖然靈敏度、特異性好，但儀器價格昂貴而不能推廣應用。高效液相色譜法(HPLC)是目前比較成熟且推廣使用的方法，不足之處是樣品處理、層析條件、樣品檢測及定量的諸多變異，使其難以標準化。

3、ELISA方法：此方法實驗時往預先包被HCY抗體的包被液體中依次加入標本、標準品、HPR標記的檢測抗體，經溫育后并徹底洗滌。在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色，顏色深淺與樣品中的含量成正相關。該法雖然對儀器要求不高，且易普及，但結果準確度相對較差。

4、放射免疫法：使放射性標記抗原和待測物與不足量的特異性抗體競爭性地結合，反應后分離并測量放射性而求得未標記抗原的量。此方法結果準確，但有放射性污染，所以不常使用。

5、酶法：該法快速、準確、靈敏度高，使用全自動生化分析儀，適用于大批樣本，簡單快捷，在臨床上應用廣泛。如CN 103954774 B中利用S-腺苷同型半胱氨酸水解酶，對樣本中的L-同型半胱氨酸反復循環反應，來檢測樣本中同型半胱氨酸的含量。但該酶法試劑盒中使用酶類較多，成本較高，且存在穩定性差等一些缺點。

現有的同型半胱氨酸試劑盒的穩定性較低，專利CN 104198726 B公開了一種穩定的同型半胱氨酸檢測試劑盒；由試劑R1及試劑R2組成，所述試劑R1包含的各組分為：緩沖液、硫醇類還原劑，乳酸脫氫酶，絲氨酸，還原性輔酶，表面活性劑，穩定劑，防腐劑；所述試劑R2包含的各組分為：緩沖液，胱硫醚β-合酶，胱硫醚β-裂解酶，表面活性劑，穩定劑，防腐劑；采用復合硫醇類還原劑使得結合型HCY更充分被還原，改善試劑的穩定性。專利CN106248666 A公開了一種穩定性強的同型半胱氨酸檢測試劑，試劑R1中主要包含緩沖液、NADH、LDH、絲氨酸、防腐劑、TCEP、保護劑、表面活性劑、乙二胺四乙酸二鈉、底物穩定性；試劑R2中主要包含緩沖液、防腐劑、保護劑、表面活性劑、胱硫醚β-合成酶、胱硫醚β-裂解酶；R2試劑通過使用三種保護劑協同保護酶類的活性，從而增強試劑的穩定性。但是上述兩種試劑盒中胱硫醚β-裂解酶的衰減仍然較快，導致胱硫醚循環酶法的試劑盒在效期保存下的穩定性不佳。

發明內容