[發(fā)明專利]一種益生菌制劑及其制備方法和應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811121014.3 | 申請日： | 2018-09-25 |
| 公開（公告）號： | CN109251874B | 公開（公告）日： | 2021-03-02 |
| 發(fā)明（設計）人： | 林松泉;莊若飛;鄒文政;喬欣君;黃榕 | 申請（專利權）人： | 廈門惠盈動物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/16;A23K50/80;A23K10/18;C02F3/34;C12R1/125;C12R1/07;C12R1/25;C12R1/23;C12R1/245;C12R1/865;C12R1/72 |
| 代理公司： | 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權代理有限公司 35218 | 代理人： | 李寧;賴秀華 |
| 地址： | 361000 福建*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 益生菌 制劑 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種益生菌制劑在改善水體或者池塘底質(zhì)中的應用，其特征在于，所述益生菌制劑為由芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌和光合菌通過液態(tài)發(fā)酵制備得到，所述芽孢桿菌由枯草芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌組成，所述乳酸菌由植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌組成，所述酵母菌由產(chǎn)朊假絲酵母和釀酒酵母組成，所述光合菌為沼澤紅假單胞菌；所述益生菌制劑中芽孢桿菌的活菌個數(shù)為3×107CFU/mL-9×107CFU/mL，所述乳酸菌的活菌個數(shù)為1×109CFU/mL-9×109CFU/mL，所述酵母菌的活菌個數(shù)為1×107CFU/mL-7×107CFU/mL，所述光合菌的活菌個數(shù)為4×105CFU/mL-6×105CFU/mL；所述芽孢桿菌中枯草芽孢桿菌的活菌個數(shù)為4×107CFU/mL-9×107CFU/mL，納豆芽孢桿菌的活菌個數(shù)為3×107CFU/mL-8×107CFU/mL；所述乳酸菌中植物乳桿菌的活菌個數(shù)為2×109CFU/mL-8×109CFU/mL，嗜酸乳桿菌的活菌個數(shù)為1×109CFU/mL-8×109CFU/mL，干酪乳桿菌的活菌個數(shù)為1×109CFU/mL-5×109CFU/mL；所述酵母菌中產(chǎn)朊假絲酵母的活菌個數(shù)為1×107CFU/mL-6×107CFU/mL，釀酒酵母的活菌個數(shù)為4×107CFU/mL-6×107CFU/mL；所述光合菌中沼澤紅假單胞菌的活菌個數(shù)為4×105CFU/mL-6×105CFU/mL；所述益生菌制劑的pH值為3.5以下；枯草芽孢桿菌源自廣東省微生物菌種保藏中心，編號為：GIM1.271；納豆芽孢桿菌源自蘇州北納創(chuàng)聯(lián)生物技術有限公司，編號為：BNCC 185324；植物乳桿菌源自廣東省微生物菌種保藏中心，編號為：GIM1.191；嗜酸乳桿菌源自廣東省微生物菌種保藏中心，編號為：GIM1.208；干酪乳桿菌源自廣東省微生物菌種保藏中心，編號為：GIM1.204；產(chǎn)朊假絲酵母源自廣東省微生物菌種保藏中心，編號為：GDM2.148；釀酒酵母源自廣東省微生物菌種保藏中心，編號為：GIM2.213；沼澤紅假單胞菌源自廣東省微生物菌種保藏中心，編號為：GIM1.167；
所述液態(tài)發(fā)酵的方法包括以下步驟：
(1)原菌種活化：將枯草芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌分別接種到已滅菌的斜面培養(yǎng)基I中好氧培養(yǎng)直至長出菌落，將冷凍保藏的植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌分別接種到已滅菌的斜面培養(yǎng)基II中好氧培養(yǎng)直至長出菌落，將產(chǎn)朊假絲酵母和釀酒酵母分別接種到已滅菌的斜面培養(yǎng)基III中好氧培養(yǎng)直至長出菌落，將沼澤紅假單胞菌接種到已滅菌的斜面培養(yǎng)基IV中厭氧培養(yǎng)直至長出菌落，得到各自活化斜面菌種；
所述斜面培養(yǎng)基I含有牛肉膏1-5g、蛋白胨5-15g、氯化鈉2-8g、瓊脂10-30g和蒸餾水1L且pH值為7.2-7.5；所述斜面培養(yǎng)基II含有蛋白胨5-15g、牛肉粉2-8g、酵母粉2-8g、葡萄糖10-30g、吐溫80 0.5-2mL、磷酸氫二鉀1-5g、乙酸鈉2-8g、檸檬酸三銨1-5g、硫酸鎂0.1-1g、硫酸錳0.01-0.1g、瓊脂粉10-30g和蒸餾水1L且pH值為6.2-6.5；所述斜面培養(yǎng)基III含有葡萄糖10-30g、蛋白胨10-30g、酵母膏5-15g、氯霉素0.05-0.2g、瓊脂粉10-30g和蒸餾水1L且pH自然；所述培養(yǎng)基IV含有蛋白胨1-5g、酵母膏1-5g、氯化鈣0.1-1g、硫酸鎂0.1-1g、瓊脂粉10-30g和蒸餾水1L且pH值為6.8-7.0；
(2)一級種子液的制備：分別將由步驟(1)得到的枯草芽孢桿菌斜面菌種和納豆芽孢桿菌斜面菌種至少部分接種到已滅菌的液體培養(yǎng)基I中，于30-40℃好氧培養(yǎng)20-30h，分別得到各自芽孢桿菌原菌液；分別將由步驟(1)得到的植物乳桿菌斜面菌種、嗜酸乳桿菌斜面菌種和干酪乳桿菌斜面菌種至少部分接種到已滅菌的液體培養(yǎng)基II中，于30-40℃厭氧培養(yǎng)18-30h，分別得到各自乳酸菌原菌液；分別將由步驟(1)得到的產(chǎn)朊假絲酵母斜面菌種和釀酒酵母斜面菌種至少部分接種到已滅菌的液體培養(yǎng)基III中，于28-30℃好氧培養(yǎng)40-50h，分別得到各自酵母菌原菌液；將步驟(1)得到的沼澤紅假單胞菌斜面菌種至少部分接種到已滅菌的液體培養(yǎng)基IV中，在鎢絲燈照射的條件下，于28-30℃厭氧培養(yǎng)2-4d，得到沼澤紅假單胞菌原菌液；
所述液體培養(yǎng)基I含有牛肉膏1-5g、蛋白胨5-15g、氯化鈉2-8g和蒸餾水1L且pH值為7.2-7.5；所述液體培養(yǎng)基II含有蛋白胨5-15g、牛肉粉2-8g、酵母粉2-8g、葡萄糖10-30g、吐溫80 0.5-2mL、磷酸氫二鉀1-5g、乙酸鈉2-8g、檸檬酸三銨1-5g、硫酸鎂0.1-1g、硫酸錳0.01-0.1g和蒸餾水1L且pH值為6.2-6.5；所述液體培養(yǎng)基III含有葡萄糖10-30g、蛋白胨10-30g、酵母膏5-15g、氯霉素0.05-0.2g和蒸餾水1L且pH值自然；所述液體培養(yǎng)基IV含有蛋白胨1-5g、酵母膏1-5g、氯化鈣0.1-1g、硫酸鎂0.1-1g和蒸餾水1L且pH值為6.8-7.0；
(3)二級種子液的制備：將步驟(2)得到的植物乳桿菌原菌液、嗜酸乳桿菌原菌液和干酪乳桿菌原菌液各自獨立地按0.5-2wt％的接種量接種到已滅菌的同一發(fā)酵培養(yǎng)基I中，于30-40℃厭氧培養(yǎng)18-20h，得到復合乳酸菌二級種子液；
(4)益生菌發(fā)酵：將枯草芽孢桿菌原菌液、納豆芽孢桿菌原菌液、產(chǎn)朊假絲酵母原菌液、釀酒酵母原菌液與沼澤紅假單胞菌原菌液各自獨立地按0.5-2wt‰接種量接入已滅菌的同一發(fā)酵培養(yǎng)基II中，于30-40℃有氧發(fā)酵18-20h，之后再以5-10wt％的接種量接入所述復合乳酸菌二級種子液，將pH值調(diào)節(jié)至6.5-7，之后于30-40℃厭氧發(fā)酵24-48h；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基I和第二發(fā)酵培養(yǎng)基II的組分相同或不同，且各自獨立地含有糖蜜30-50g、酵母膏1-2g、磷酸氫二鉀0.2-0.25g、硫酸鎂0.2-0.25g、硫酸錳0.05-0.1g和蒸餾水1L且pH值為7.2-7.5。
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