[發(fā)明專(zhuān)利]基于檢測(cè)卡的疫苗抗體檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811116318.0
• 申請(qǐng)日: 2018-09-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109374900B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱靈冰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 邱靈冰
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 深圳市恒和大知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44479
• 代理人: 何園園

本發(fā)明公開(kāi)一種基于檢測(cè)卡的疫苗抗體檢測(cè)方法。本發(fā)明的檢測(cè)卡包括試紙條，且試紙條設(shè)置有樣品墊層、膠體金層、硝酸纖維素膜和吸水層。本發(fā)明利用膠體金免疫層析技術(shù)，可特異的檢測(cè)出不同疫苗產(chǎn)生的特異性抗體。由于檢測(cè)卡方便，樣本用量少，僅需50μL血清、血漿或全血即可實(shí)現(xiàn)疫苗抗體的檢測(cè)，并且操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，不限場(chǎng)地，適用于臨床及社區(qū)推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于檢測(cè)卡的疫苗抗體快速高效方法。

背景技術(shù)

疫苗是為了預(yù)防、控制傳染病的發(fā)生、流行，用于人體預(yù)防接種的預(yù)防性生物制品。預(yù)防接種用的生物制品包括疫苗、菌苗和類(lèi)毒素。其中，由病菌制成的為菌苗；由病毒、立克次體、螺旋體制成的為疫苗，統(tǒng)稱(chēng)為疫苗。疫苗是將病原微生物(如細(xì)菌、立克次氏體、病毒等)及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預(yù)防傳染病的自動(dòng)免疫制劑。當(dāng)接種這種不具傷害力的病原菌后，免疫系統(tǒng)便會(huì)產(chǎn)生一定的保護(hù)物質(zhì)，如免疫激素、活性生理物質(zhì)、特殊抗體等；當(dāng)機(jī)體再次接觸到這種病原菌時(shí)，機(jī)體的免疫系統(tǒng)被迅速激活，產(chǎn)生特異性抗體以保護(hù)機(jī)體。

因?yàn)閭€(gè)體體質(zhì)差異或者疫苗本身及其他客觀因素，疫苗注射后機(jī)體內(nèi)是否產(chǎn)生了有效抗體，目前還沒(méi)有合適的方便、簡(jiǎn)易、快捷的檢測(cè)方法。其中疫苗引發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的抗體，可以用膠體金免疫層析法來(lái)檢測(cè)。

膠體金免疫層析技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。優(yōu)點(diǎn)：

1、使用方便快速，不限場(chǎng)所，所有反應(yīng)能在15分鐘內(nèi)完成；

2、成本低，不需要特殊的儀器設(shè)備；

3、應(yīng)用范圍廣，可適應(yīng)多種檢測(cè)條件；

4、可以進(jìn)行多項(xiàng)檢測(cè)，若樣品比較難獲得，多項(xiàng)檢測(cè)可以節(jié)省樣品，降低成本；

5、標(biāo)記物穩(wěn)定，標(biāo)記樣品在4℃貯存兩年年以上，無(wú)信號(hào)衰減現(xiàn)象；

6、膠體金本身為紅色，不需要加入發(fā)色試劑，省卻了酶標(biāo)的致癌性底物及終止液的步驟，對(duì)人體無(wú)毒害。

目前，現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有實(shí)現(xiàn)方便、簡(jiǎn)易、快捷且靈敏度高的檢測(cè)抗體的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于檢測(cè)卡的疫苗抗體檢測(cè)方法，其包括以下步驟：

(1)過(guò)濾去除待測(cè)樣品中的雜質(zhì)得到進(jìn)樣液，

(2)在適于反應(yīng)的條件下使所述進(jìn)樣液與膠體金顆粒反應(yīng)進(jìn)行復(fù)合物，其中所述膠體金顆粒的平均直徑為15-50nm；

(3)過(guò)濾去除步驟(2)中至少部分未結(jié)合抗體的膠體金顆粒，得到層析液；

(4)使步驟(3)的層析液進(jìn)行層析，并使抗體結(jié)合于檢測(cè)線(xiàn)T線(xiàn)；

(5)通過(guò)作為對(duì)照的C線(xiàn)判斷步驟(4)中的結(jié)果是否可信。

優(yōu)選地，本發(fā)明的疫苗抗體檢測(cè)方法中，所述檢測(cè)卡包括試紙條，且所述試紙條設(shè)置有樣品墊層和第一過(guò)濾層，所述第一過(guò)濾層具有允許抗體分子通過(guò)但不能允許分子團(tuán)聚物通過(guò)的孔徑，且通過(guò)所述第一過(guò)濾層進(jìn)行步驟(1)。

優(yōu)選地，本發(fā)明的疫苗抗體檢測(cè)方法中，所述試紙條進(jìn)一步包括膠體金層，且所述膠體金層包含玻璃纖維層和分散于所述玻璃纖維層的結(jié)合疫苗特異性抗體的膠體金標(biāo)記物，所述膠體金標(biāo)記物為針對(duì)待檢測(cè)疫苗抗體的抗抗體和膠體金顆粒的結(jié)合物，通過(guò)在所述膠體金層進(jìn)行步驟(2)。

優(yōu)選地，本發(fā)明的疫苗抗體檢測(cè)方法中，所述試紙條進(jìn)一步包括第二過(guò)濾層，所述第二過(guò)濾層具有允許小分子通過(guò)但不能允許抗體分子通過(guò)的孔徑，所述第二過(guò)濾層的至少一部分設(shè)置于所述膠體金層的下方，且通過(guò)所述第二過(guò)濾層進(jìn)行步驟(3)。