[發明專利]空間鄰近化學發光法檢測D-二聚體的試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201811115058.5
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN109142336A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 奚偉紅;朱丹丹;廖鴛鴦
• 申請（專利權）人: 無錫壹閃生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/535;G01N33/577
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司 11514
• 代理人: 向霞

本發明涉及一種空間鄰近化學發光法檢測D?二聚體的試劑盒及其檢測方法。試劑盒包括：酶標記物、發光標記物、輔助劑、觸發劑和校準品；其中，校準品包括不同濃度D?Dimer抗原的校準品和0.1M磷酸鹽稀釋液；酶標記物的組分包括過氧化物酶標記的D?Dimer檢測抗體和0.05M磷酸鹽緩沖液；發光標記物的組分包括9,10?二氫吖啶標記的D?Dimer捕獲抗體和0.05M Tris緩沖液；輔助劑的組分包括發光輔助劑和枸櫞酸鹽緩沖液；觸發劑選用0.05M Tris緩沖液。本發明提供的檢測方法作為一種真正意義上的均相化學發光技術，無需載體，沒有包被、洗滌過程，試劑盒組分少，且靈敏度高、重復性好、操作簡單。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種空間鄰近化學發光法檢測D-二聚體的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

D-二聚體(D-Dimer)是交聯纖維蛋白的降解產物，其形成機理為：纖維蛋白原在凝血酶的作用下，從α鏈及β鏈依次脫去多肽A和多肽B，形成纖維蛋白Ⅰ和纖維蛋白Ⅱ，纖維蛋白在因子XII的作用下交聯在血管壁上，并被活化的纖溶酶裂解而產生各種FDP碎片。由于γ鏈的交聯，便產生了包含γ鏈相連的2個D片段，即D-二聚體，它的分子量約為18萬道爾頓，體內半衰期為8h。

D-二聚體是特異性反映體內繼發性纖溶性亢進的標志物之一，多種疾病均可引起D-二聚體的升高。研究資料表明：血漿中D-二聚體的水平與心血管疾病密切相關，心血管疾病血漿D-二聚體含量陽性率的高低依次為主動脈夾層、急性心肌梗死、不穩定型心絞痛、穩定型心絞痛、先天性心臟病、心律失常，表明病情越危機，D-二聚體上升幅度越大，陽性率越高。其中主動脈夾層陽性率達100％，D-二聚體的檢測對其具有非常好的陰性預期值，因此其對于主動脈夾層的排除診斷有較高的應用價值。

深靜脈血栓(DVT)形成是肺栓塞的主要易患因素，大約51％～71％的肺栓塞的血栓栓子來源于DVT。DVT的發現雖不能直接診斷肺栓塞，但卻能給予很大的提示。通過靜脈造影、超聲多普勒血管檢查以及肢體阻抗容積圖等檢查有助于診斷DVT，而目前許多研究表明血漿D-二聚體含量檢測也是DVT篩查的一種有效手段。研究發現靜脈造影證實為DVT的患者血漿D-二聚體水平均升高，若采用以D-二聚體>500ng/mL為陽性，則檢查的敏感性和特異性分別為95％和77％，陰性預測值為92％。因此，臨床上懷疑DVT患者若D-二聚體檢測結果正常，則有助于排除VT的診斷。

在抗凝及溶栓治療方面，D-二聚體還具有一定指導意義，可作為繼發性纖溶亢進的標志，觀察肝素抗凝效果及血栓溶解情況。溶栓治療后，4～8h可見D-二聚體水平明顯增高，這與大量新鮮血栓溶解有直接關系，之后可見逐漸降低，并于24h～7d維持至正常水平。這說明此時的治療并無明顯效果，血栓大小變化不大，若出現降低后再次增高現象，則表明再次形成血栓，陳舊性血栓患者不會出現D-二聚體水平上升現象，若異常增高則說明存在新的血栓形成。在腦梗死急性期溶栓治療中，隨著血栓溶解，血漿中D-二聚體含量急劇上升，當血栓完全溶解，血管再通后，其含量迅速下降。如持續較高的水平不降，提示血栓未完全溶解或有繼發性血栓形成，因而在腦梗死治療，尤其在溶栓治療中，動態檢測D-二聚體含量對腦梗死診斷、療效觀察及預后有重要臨床意義。

D-二聚體是交聯纖維蛋白的特異性降解產物，是血栓形成和溶解的標志物。它的生成和增高表明體內存在高凝狀態，血栓形成和繼發纖溶性增強。有文獻報道：AMI的血栓形成率最高，SAP血栓發生率最低，UAP血栓形成率介于AMI和SAP之間。因此，測定D-二聚體對于冠心病的臨床分型有一定的參考價值。