[發(fā)明專利]利用生物酶制備薯蕷皂苷元的方法及其所用生物材料

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811113218.2
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN110938612B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余利巖;劉萬倉;向海波;馬百平;張濤;龐旭;劉紅宇;蘇靜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12P33/20
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.C和D在制備薯蕷皂苷元中的應(yīng)用，所述C為FBG1或與FBG1相關(guān)的生物材料；所述D為FRG1或與FRG1相關(guān)的生物材料；

所述FBG1為A1)或A2)或A3)的蛋白質(zhì)：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質(zhì)；

A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第19-621位的蛋白質(zhì)；

A3)在A1)或A2)所示的蛋白質(zhì)的羧基端或/和氨基端融合蛋白標(biāo)簽得到的融合蛋白；

所述與FBG1相關(guān)的生物材料為下述B1)至B8)中的任一種：

B1)編碼所述FBG1的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表達(dá)盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重組載體；

B4)含有B2)所述表達(dá)盒的重組載體；

B5)含有B1)所述核酸分子的重組微生物；

B6)含有B2)所述表達(dá)盒的重組微生物；

B7)含有B3)所述重組載體的重組微生物；

B8)含有B4)所述重組載體的重組微生物；

所述FRG1為R1)或R2)或R3)的蛋白質(zhì)：

R1)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白質(zhì)；

R2)氨基酸序列是SEQ ID No.4的第24-670位的蛋白質(zhì)；

R3)在R1)或R2)所示的蛋白質(zhì)的羧基端或/和氨基端融合蛋白標(biāo)簽得到的融合蛋白；

所述與FRG1相關(guān)的生物材料為下述S1)至S8)中的任一種：

S1)編碼所述FRG1的核酸分子；

S2)含有S1)所述核酸分子的表達(dá)盒；

S3)含有S1)所述核酸分子的重組載體；

S4)含有S2)所述表達(dá)盒的重組載體；

S5)含有S1)所述核酸分子的重組微生物；

S6)含有S2)所述表達(dá)盒的重組微生物；

S7)含有S3)所述重組載體的重組微生物；

S8)含有S4)所述重組載體的重組微生物；

所述應(yīng)用以盾葉新苷為底物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：B1)中編碼所述FBG1的核酸分子為Fbg1基因，所述Fbg1基因為如下C1)-C3)中任一所述的DNA分子：

C1)編碼序列是SEQ ID No.1的DNA分子；

C2)編碼序列是SEQ ID No.1的第55-1866位核苷酸的DNA分子；

C3)與C1)或C2)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且編碼所述FBG1的DNA分子；

S1)中編碼所述FRG1的核酸分子為Frg1基因；所述Frg1基因為如下D1)-D3)中任一所述的DNA分子：

D1)編碼序列是SEQ ID No.3的DNA分子；

D2)編碼序列是SEQ ID No.3的第70-2013位核苷酸的DNA分子；

D3)與D1)或D2)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且編碼所述FRG1的DNA分子；

B3)或B4)所述的重組載體為將pPICZαA的EcoR I和Not I識別位點(diǎn)間的片段替換為SEQID No.1的第1-1863位所示的Fbg1基因，保持pPICZαA的其它序列不變得到的重組表達(dá)載體，命名為pPICZαA-Fbg1；

B5)至B8)的重組微生物為將pPICZαA-Fbg1導(dǎo)入酵母中得到的表達(dá)氨基酸序列是SEQID No.2的蛋白質(zhì)的重組酵母；

S3)或S4)所述的重組載體為將pPIC9K的EcoR I和Not I識別位點(diǎn)間的片段替換為SEQID No.3的第1-2010位所示的Frg1基因，保持pPIC9K的其它序列不變得到的重組表達(dá)載體，命名為pPIC9K-Frg1；

S5)至S8)的重組微生物為將pPIC9K-Frg1導(dǎo)入酵母中得到的表達(dá)氨基酸序列是SEQ IDNo.4的蛋白質(zhì)的重組酵母。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述應(yīng)用包括：

1)用所述FRG1將盾葉新苷轉(zhuǎn)化為延齡草苷；

2)用所述FBG1將延齡草苷轉(zhuǎn)化為薯蕷皂苷元。