[發明專利]一種癲癇動物模型的構建方法

有效

• 申請號: 201811100237.1
• 申請日: 2018-09-20
• 公開（公告）號: CN109022486B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 李春巖;郭默然;段偉松;伊樂;李忠堯;劉亞坤;畢悅;李媛媛;張杰
• 申請（專利權）人: 河北醫科大學第二醫院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 河北東尚律師事務所 13124
• 代理人: 李國聰;王瑞濤

本發明涉及一種癲癇動物模型的構建方法，屬于動物模型構建技術領域。該方法將FGF9^fl/fl小鼠與GABA能神經元Cre小鼠交配，獲得FGF9^fl/+VGAT?Cre雜合敲除小鼠，之后再與FGF9^fl/fl純合小鼠交配，獲得FGF9純合敲除小鼠(FGF9^fl/flVGAT?Cre)，即癲癇動物模型。該癲癇動物模型更貼近臨床癲癇癥狀及機制，為臨床癲癇病因學的研究，以及進一步的診斷和治療提供了良好的研究工具。

技術領域

本發明涉及一種動物模型構建方法，更具體地，涉及一種癲癇動物模型的構建方法，屬于動物模型構建技術領域。

背景技術

癲癇(epliepsy)是一組由于腦部神經元異常過度放電所引起的突然、短暫、反復發作的中樞神經系統(Central nervous system，CNS)功能失常的慢性疾病和綜合征，是最常見的嚴重的神經系統疾病之一。據世界衛生組織估計，全球大約有7千多萬癲癇患者，約占了世界人口的1％。我國癲癇的患病率在4％到7％之間，約有600萬左右的活動性癲癇患者，同時每年有40萬左右新發癲癇患者。癲癇可嚴重降低患者生活質量、加重患者家庭及社會經濟負擔，死亡危險性為一般人群的2-3倍，已經成為重要的社會問題。但是，癲癇的發病機制極其復雜，迄今為止尚未完全闡明。因此，研究癲癇發病機制以及開發新的治療藥物迫在眉睫。

建立良好的動物模型是研究疾病的基礎。目前，癲癇動物模型主要分為點燃模型和基因敲除模型。點燃模型(kindling model)是通過重復給予一個閾下電或化學刺激引起部分或全面性癲癇發作的模型。電刺激過程十分復雜，且所埋置電極的一端暴露體外，長期保持在確切位置十分困難，因此成功率并不高。化學藥物也能夠引出點燃現象，比如利多卡因、戊四氮、印方以毒素和紅藻氨酸等。化學藥物點燃需要反復給與刺激，勞動強度太大，整個過程耗時耗力太長。此外，如果需要誘導出自發癲癇則需要過度點燃，需要的刺激量更大，小鼠死亡率較高，也缺乏一個可靠的標準。目前基因敲除和轉基因技術已經在癲癇模型研究取得很大進展，成功制作了多個癲癇模型，例如cystatin B基因敲除模型、鉀通道基因Kv1.1敲除模型、UBE3a基因敲除模型等，這些癲癇遺傳學動物模型為遺傳性癲癇的分子病理研究，以及為人類癲癇篩選候選基因提供了捷徑。

FGF9是一種成纖維細胞生長因子，具有神經膠原激活因子活性，參與了神經發育、細胞凋亡、胚胎發育和癌癥進展等多項生理和病理過程。但是到現在為止，國內外未見FGF9與癲癇相關的報道。我們工作顯示在GABA能神經元中敲除FGF9能夠誘導小鼠癲癇。因此，研究FGF9條件敲除小鼠的癲癇機制，對闡明癲癇的作用機制以及尋找新的靶點提供依據具有非常重要的研究意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術存在的缺陷提供一種癲癇動物模型的構建方法。

本發明的目的是通過以下技術方案予以實現的。

γ-氨基丁酸(gamma-Aminobutyric acid,GABA)是中樞神經系統內最具代表性的抑制性神經遞質，在中樞神經系統廣泛分布，主要作用是平衡谷氨酸遞質的興奮性活性。FGF9是一種分泌性的成纖維細胞生長因子，參與了神經發育、細胞凋亡、胚胎發育和癌癥進展等多項生理和病理過程，對腦神經元有維持生存和促進生長及修復受損的作用。小鼠FGF9基因在14號染色體正鏈上，全長54.2kb，發明人通過研究發現GABA能神經元中條件性敲除FGF9基因(FGF9^fl/flVGAT-cre)小鼠出現后肢陣攣，全身強直-陣攣性發作等一系列癲癇癥狀，部分小鼠死于癲癇持續狀態。腦電圖(EEG)顯示FGF9^fl/flVGAT-cre小鼠出現顯著的癲癇波。

于是，本發明在上述研究的基礎上，提供GABA能神經元中條件性敲除FGF9基因的方法以及在構建癲癇動物模型中的應用。