[發(fā)明專利]BVDV Erns蛋白和抗體及篩選BVDV感染的牛的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811095791.5
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109136267B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賀筍;李俊輝;程蘭玲;杜久斌;孫聰;石丁峰
• 申請（專利權(quán)）人: 天康生物股份有限公司
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C07K14/18;C07K16/10;G01N33/577
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 黃彩榮

本發(fā)明提供了一種BVDV E^rns蛋白和抗體及篩選BVDV感染的牛的方法，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，該BVDV E^rns蛋白使用昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)表達(dá)，其表達(dá)的蛋白和與該蛋白結(jié)合的單克隆抗體，以及包含該E^rns蛋白和/或單克隆抗體的試劑盒可以廣泛的應(yīng)用于BVDV的相關(guān)研究。當(dāng)牛經(jīng)BVDV E2亞單位疫苗免疫后，牛的血清中會存在結(jié)合BVDV E2蛋白的抗體而不存在能夠與BVDV E^rns蛋白相結(jié)合的抗體。當(dāng)牛被BVDV的全病毒感染、或者經(jīng)全病毒的滅活疫苗免疫后，牛的血清中會存在可以與BVDV E^rns蛋白相結(jié)合的抗體。因此本發(fā)明利用這二者之間的差異，來判斷經(jīng)BVDV E2亞單位疫苗免疫后的牛是否被BVDV病毒感染，方便快捷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種BVDV E^rns蛋白和抗體及篩選BVDV感染的牛的方法。

背景技術(shù)

牛病毒性腹瀉病毒在紐約州首先發(fā)現(xiàn)，是一種以腹瀉、咳嗽和發(fā)熱為主的牛傳染性疾病，稱為牛病毒性腹瀉(BVD)。后又發(fā)現(xiàn)一種發(fā)病率低而死亡率高，以胃腸道廣泛潰瘍?yōu)槊黠@病變的牛的疾病，稱為粘膜病 (Mucosaldisease，MD)。1971年美國獸醫(yī)協(xié)會將牛病毒性腹瀉(BVD)和粘膜病(MD)統(tǒng)一命名為牛病毒性腹瀉/粘膜病，簡稱BVD/MD。

牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)是黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)的代表種，BVDV與屬內(nèi)的豬瘟病毒 (Classicalswine fever virus，CSFV)和綿羊的邊界病毒(Border disease virus，BDV)存在抗原相關(guān)性，在血清學(xué)上存在著交叉反應(yīng)，而且能夠突破宿主特異性發(fā)生交叉感染，因此BVDV不僅是牛的重要病原之一，而且能夠感染綿羊、山羊、豬、鹿和其它反芻動物。

BVDV病毒粒子近球形，直徑約為40-60nm，核衣殼直徑為25-30nm，有囊膜。在CsCl中浮密度為1.14g/cm3，沉降系數(shù)S20＝140。病毒對乙醚、氯仿以及pH3.0敏感。病毒不耐熱，56℃可使其滅活，MgCl2對病毒不起保護(hù)作用。病毒在低溫下穩(wěn)定，真空凍干的病毒可在-60～-70℃下保存較長時間。

BVDV基因組為單股正鏈RNA，基因組大小約為12.5kb，分為5’端非翻譯區(qū)、開放閱讀框架區(qū)和3’端非翻譯區(qū)。其中E2蛋白是決定BVDV抗原性的主要部位，也是與抗BVDV抗體結(jié)合、介導(dǎo)免疫中和反應(yīng)與宿主細(xì)胞識別、吸附的主要部位。編碼E2蛋白的基因位于ORF的2077-3198位，由374個氨基酸殘基組成。非糖基化蛋白分子量約為42kDa。

BVDV E2亞單位疫苗即將上市，但用于鑒別免疫疫苗產(chǎn)生抗體還是感染野毒產(chǎn)生抗體的有效檢測方法尚未建立。并且在目前的研究中BVDV相關(guān)的蛋白研究較少，缺少研究BVDV的相關(guān)蛋白和抗體，以至于缺乏建立鑒別免疫疫苗產(chǎn)生抗體還是感染野毒產(chǎn)生抗體的有效檢測方法的技術(shù)基礎(chǔ)。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供了一種表達(dá)BVDV E^rns蛋白的表達(dá)載體，緩解了現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺乏一種能夠表達(dá)BVDV E^rns蛋白的載體和系統(tǒng)的問題。

本發(fā)明的第二目的在于提供了一種上述表達(dá)載體表達(dá)的BVDV E^rns蛋白，該蛋白可以廣泛的應(yīng)用于BVDV的相關(guān)研究，為BVDV相關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

本發(fā)明的第三目的在于提供了一種與上述BVDV E^rns蛋白結(jié)合的單克隆抗體，該單克隆抗體可以廣泛的應(yīng)用于BVDV的相關(guān)研究，為BVDV相關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。