[發明專利]一種再生因子的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201811094768.4
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109172605A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 宋麗萍;張娟;羅旭梅;彭芳芳;張澤辛;黃娟;吳克琴;楊燕;肖春;胡火珍;薛紅
• 申請（專利權）人: 四川馳鼎盛通生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P17/14;A61P25/00;A61K8/99;A61Q19/00;A61Q19/08;C12N5/0775;A61K35/16
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明公開了一種再生因子的制備方法，包括以下步驟：體外培養臍帶來源的間充質干細胞；在細胞培養到一定代數時，當細胞匯合率達到一定程度時，將原培養基棄去，用生理鹽水輕輕清洗細胞兩遍，盡量去除殘留的培養基原液，然后加入生理鹽水，繼續培養，細胞會分泌多種因子，因子溶解到生理鹽水中，形成細胞分泌液；收集上清液至離心管中離心，去除組織塊、細胞碎片；將上清液分裝后凍干或凍存于冰箱，長期保存，制備得到再生因子。該種再生因子為干細胞分泌的多種可溶性蛋白，純度較高，且去除了原細胞培養基的影響，使用效果得到提升。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，涉及一種再生因子的制備方法及應用。

背景技術

近年來，隨著對間充質干細胞研究的不斷深入，其分泌因子已成為研究者們的熱點。間充質干細胞可以分泌多種具有生物活性的細胞因子，包括肝細胞生長因子(HGF)、轉化生子因子-a(TGF-a)、前列腺素E2、血管內皮生長因子(VEGF)、成纖維細胞因子(FGF)、胰島素樣生長因子-1(IGF-1)、神經生長因子(NGF)、堿性成纖維生長因子(bFGF)、腦源性神經營養因子(BDNF)等，這些可溶性細胞因子可以有效地調控機體細胞信號傳導、活化人體干細胞，抑制T淋巴細胞的增殖；參神經系統的修復和再生；參與損傷衰老細胞的增生分化等。

目前的基礎研究提示，間充質干細胞可以應用于神經細胞、毛囊干細胞、皮膚干細胞等的再生，從而用于治療神經損傷、脫發、美容等。而目前臨床上對于上述部分疾病暫時沒有非常有效的方法。以脫發為例：男性雄激性禿發系統冶療最有效的冶療方案主要是口服非那雄胺，聯合局部外用米諾地爾。脫發嚴重者則采取毛發移植手術(王羿婷，孫蔚凌，范衛新.非那雄胺和米諾地爾治療雄激素性禿發的臨床研究[J].臨床皮膚科雜志，2011,40(7)：387-390.)。但是非那雄胺口服并不適用于女性激素性脫發、休止期脫發如產后脫發增加或者絕經后脫發(趙辨.中國臨床皮膚病學[M].南京:江蘇科學技術出版社，2010:1185-1190.)。但現有的治療方法缺點較多，效果有限，可引起頭痛、瘙癢、毛發移植價格昂貴，移植后有排斥、脫落率大、操作不方便等。而使用干細胞手術治療，費用昂貴，操作不便，安全風險較高。

對于間充質干細胞治療疾病的機理的進一步研究發現，干細胞治療這類疾病很重要的原因之一是其強大的外泌能力，通過細胞分泌的多種細胞因子，及外泌體攜帶的小分子核酸和更小分子如PFG2等的作用來發揮輔助治療疾病的功效。而這些分泌到胞外的物質即本文所述再生因子。因此再生因子可用于輔助治療神經損傷性疾病、脫發，使用方便簡單易操作，而不存在干細胞輸注可能引起的出血、感染等手術風險。

另一方面，在美容行業，皮膚抗衰的治療手段多樣，但很多都會對皮膚造成物理性損傷。傳統上所謂的干細胞美容，異體的通常會引起免疫排斥反應，而且存在一定的倫理問題。自體的一般采用脂肪干細胞，取材痛苦、有感染風險，而且脂肪組織會游走，維持的時間較短。因此，將某些細胞因子添加到美容化妝品，常見的如表皮生長因子(EGF)、堿性成纖維生長因子(bFGF)等，不僅具有一般化妝品的保濕美白功效，還能夠修復受損皮膚，消除皮膚皺紋，收縮毛孔，改善面色等，細胞因子的作用越來越受到人們的關注，但這種單一的添加通常效果有限。因此含多種細胞因子的化妝品可有效改善肌膚狀態，保濕美白肌膚，修復受損肌膚，同時緩解敏感肌，而幾乎無安全風險。此外，本方法提前將細胞原培養液去除，替換為生理鹽水，使得再生因子糖分等雜質含量降低，避免使用時出現皮膚干燥等不良效果，使用舒適感提升。

發明內容

有鑒于此，本發明針對提供了一種再生因子的制備方法及應用。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種再生因子的制備方法，包括以下步驟：

步驟1、體外培養臍帶來源的間充質干細胞；