[發明專利]一種用于檢測黃曲霉毒素B1的定性定量免疫層析試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201811094211.0
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109187961A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 譚麗容;程敏;陳媛;張勇;張凱義;呂茜
• 申請（專利權）人: 無限極（中國）有限公司;弘正道（中國）中藥研究有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N33/531;G01N33/532;G01N33/533
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎;趙青朵

1.一種用于檢測黃曲霉毒素B₁的定性定量免疫層析試紙條，其特征在于，在底板上依次搭接設置有濾紙、樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜和吸水紙；

所述玻璃纖維膜上附著有膠體金標記的黃曲霉毒素B₁單克隆抗體；

所述硝酸纖維素膜上設置有檢測線和質控線，所述檢測線上包被有熒光微球標記的黃曲霉毒素B₁人工抗原，所述質控線上包被有第二抗體。

2.根據權利要求1所述的定性定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述熒光微球標記的黃曲霉毒素B₁人工抗原為偶聯有大分子蛋白和熒光微球的黃曲霉毒素B₁。

3.根據權利要求2所述的定性定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述大分子蛋白為牛血清白蛋白或卵清蛋白。

4.根據權利要求2所述的定性定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述熒光微球為直徑0.01～10μm的稀土離子作為標記物來制備的包裹熒光物質的微球。

5.根據權利要求4所述的定性定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述熒光物質為有機或無機的熒光物質，或者為多種熒光物質的摻雜物，或者為量子點。

6.根據權利要求1所述的定性定量免疫層析試紙條，其特征在于，所述膠體金顆粒為直徑10～100nm的金顆粒。

7.如權利要求1至6中任一項所述定性定量免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

將黃曲霉毒素B₁與大分子偶聯，得到黃曲霉毒素B₁人工抗原，然后采用熒光微球對黃曲霉毒素B₁人工抗原進行標記，得到熒光微球標記的黃曲霉毒素B₁人工抗原；

在硝酸纖維素膜的檢測線位置包被熒光微球標記的黃曲霉毒素B₁人工抗原，在硝酸纖維素膜的質控線位置包被第二抗體；

采用膠體金顆粒對黃曲霉毒素B₁單克隆抗體進行標記，得到膠體金標記的黃曲霉毒素B₁單克隆抗體，將膠體金標記的黃曲霉毒素B₁單克隆抗體附著于玻璃纖維膜上；

在底板上依次搭接粘貼濾紙、樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜、吸水紙，得到用于檢測黃曲霉毒素B₁的定性定量免疫層析試紙條。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述膠體金標記的黃曲霉毒素B₁單克隆抗體的噴涂量為1.5～2.5μL/cm。

9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述熒光微球標記的黃曲霉毒素B₁人工抗原的包被濃度為0.2～3.0mg/mL，噴涂量為0.7～0.8μL/cm；所述第二抗體的包被濃度為0.5～5.0mg/mL，噴涂量為0.7～0.8μL/cm。

10.一種定性定量檢測黃曲霉毒素B₁的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)定性檢測

在權利要求1至6中任一項所述定性定量免疫層析試紙條的樣品墊上加入檢測樣本，反應10～12min后，觀察試紙條檢測線和質控線出現的紅色條帶情況：

檢測線和質控線都顯示紅色條帶，則檢測樣本中黃曲霉毒素B₁的含量小于5μg/kg，定性判斷為陰性；

檢測線不顯示紅色條帶，質控線顯示紅色條帶，則檢測樣本中黃曲霉毒素B₁含量大于等于5μg/kg，定性判斷為陽性；

(2)定量檢測

檢測定性判斷為陽性的試紙條的熒光強度，根據標準曲線得到檢測樣本中黃曲霉毒素B₁的含量。