[發明專利]一種用于擴增LINC02253基因的引物對及其應用

有效

• 申請號: 201811092750.0
• 申請日: 2018-09-17
• 公開（公告）號: CN109266746B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 袁小琴;周倩雯;葛盛;左思雨
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 殷星

本發明公開了一種用于擴增LINC02253基因的引物對及其應用，主要是對結腸鏡樣本或者手術標本進行實時熒光定量PCR檢測LINC02253/GAPDH值，若比值≥0.00018為陽性，0.00018為陰性。此法為一種輔助診斷工具，陽性患者若病理學檢測陰性也需定期復查。首先PCR檢測方法方便簡單適合各級醫院推廣使用。而取活檢樣本進行檢測有助于確定病灶，定位腫瘤。因此LINC02253基因在結直腸癌診斷中具有較高的準確性、特異性和實用性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種用于擴增LINC02253基因的引物對及其應用。

背景技術

結直腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤，當今最常見的疾病之一，其發生率僅次于胃癌和食道癌，每年全球有約 120 萬名患者被確診為結直腸癌，而有超過 60 萬名患者直接或間接死于結直腸癌。雖然遺傳因素是結直腸癌的危險因素之一，但大部分結直腸癌都是散發的，并在幾年內以腺瘤-腫瘤的形式發生。在生存期方面，I 期患者的 5 年生存率可達 90% 以上，而IV期患者只有略大于10%的生存率。內鏡或血液篩查已被證實能有效降低結直腸癌發病率和死亡率。結直腸癌的疾病分期是最重要的預后因素。比如，2001年到2007年間，美國不同分期的結直腸癌患者的5年生存率分別為 90.1%（I 期），69.2%（II 期和III 期）和 11.7%（IV 期），可見對結直腸癌進行早期診斷對于結直腸癌的治療和預后具有重要意義。

目前臨床上運用在結直腸癌中的分子標記物，如微衛星不穩定、免疫系統細胞浸潤和KRAS 和其他作為預后指標的基因突變，主要是與預后和治療相關的，而在早期診斷上還有欠缺，在其他腫瘤中近年來國內外研究發現，在癌癥發生時，外周血液中循環DNA及RNA含量增加，并含有由癌癥細胞凋亡或死亡所釋放的特殊DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）及RNA，其中有腫瘤突變DNA（circulating mutant ctDNA）或異常甲基化片段，如K-ras、P53和FHIT突變DNA，P16、APC、DAPK基因甲基化片段等，可作為分子診斷的標記物，用PCR擴增的方法進行定性或突變DNA定量測定，可用于肺癌和其他癌癥的早期發現、療效監測和預后判斷。這種外周血檢測方便快捷，對病人無傷害，病人依從性高，但存在定位差,特異性差的缺陷，所以我們希望能夠提出更加高定位性高特異性的方法幫助進行結直腸癌的早期診斷。

而對于高定位性高特異性的早期診斷方法目前應用還是停留在熒光定量PCR檢測活檢組織EB病毒感染，輔助診斷鼻咽癌和組織病理學結合PCR檢測尖銳濕疣等等。對于結直腸癌卻沒有相關早期診斷方法，我們就想提出可以輔助組織病理早期診斷結直腸癌的方法。lncRNA是一類長度大于200個核苷酸，是不具備蛋白質編碼功能的RNA分子，以RNA的形式調控蛋白編碼基因在表觀修飾水平調控、轉錄水平調控和轉錄后水平調控等多個層面的表達水平。最近研究表明許多lncRNA與腫瘤的發生發展及轉移有緊密聯系，且能提供更準確地診斷及治療依據，比如前列腺癌中的lncRNA-PCA3可能成為前列腺癌的早期診斷的可靠標記物。

授權公告號CN102565267B公開了篩查結直腸癌的試劑盒，該發明提供的篩查結直腸癌的試劑盒，包括用于檢測磷脂含量的裝置和由磷脂含量建立的比對卡；所述磷脂為SPC、14:0LPC、16:0LPC、18:2LPC、18:1LPC、18:0LPC、20:4LPC、20:0LPC、22:6LPC 和22:0LPC。該發明開發有效的結直腸癌早期診斷分子標記，建立了分子檢測模型，根據此模型可以檢測靈敏度和特異度可達88％和80％，利用這些脂類分子對結直腸癌和正常對照的區分效果優于近些年來很多研究結直腸癌早期診斷的標志物。然而該試劑盒檢測需用到的液質聯用儀價格昂貴，導致其檢測成本增高，并不利于普及。