[發明專利]一種生產米黑根毛霉脂肪酶pRML酶粉的方法有效
| 申請號： | 201811092258.3 | 申請日： | 2018-09-19 |
| 公開（公告）號： | CN110923216B | 公開（公告）日： | 2021-08-06 |
| 發明（設計）人： | 黃金金;馬艷;黃蓉;卜偉;葉夢奇;鄭維發 | 申請（專利權）人： | 江蘇師范大學 |
| 主分類號： | C12N9/20 | 分類號： | C12N9/20;C12R1/84 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 周敏 |
| 地址： | 221000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 生產 根毛 脂肪酶 prml 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種生產米黑根毛霉脂肪酶pRML酶粉的方法，其特征在于，包括步驟：
S1：構建含4拷貝數脂肪酶基因pro-rml的能夠表達Pro-RML的工程菌株，所述脂肪酶基因pro-rml的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述工程菌株為巴斯德畢赤酵母；
S2：培養工程菌株；
S3：經誘導表達獲得含米黑根毛霉脂肪酶pRML的發酵液，所述誘導條件為每24小時補充一次誘導物甲醇，至甲醇終濃度為1.0％v/v；
S4：將發酵液于4℃，5000rpm條件下離心10min，之后取發酵液上清40體積份置于容器中，調節pH至8.0，將容器放置在-20℃的環境內，直至容器內的液體表面出現結冰；
S5：向容器中加入8體積份-20℃預冷的丙酮，邊加邊緩慢攪拌，之后-20℃靜置10min，再向容器中緩慢加入72體積份-20℃預冷的丙酮，邊加邊緩慢攪拌，之后-20℃靜置2-3h，于8000rpm、4℃條件下離心10min，棄上清，收集沉淀；
S6：向步驟S5得到的沉淀中加入2倍沉淀物體積的預冷丙酮，攪拌混勻，于8000rpm、4℃條件下離心10min；重復操作一次；
S7：風干沉淀，得米黑根毛霉脂肪酶pRML酶粉。
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