[發明專利]一種檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201811092187.7
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109100516A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 劉楊;翟濤;高威;孫成艷;何浩會
• 申請（專利權）人: 迪瑞醫療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 張偉

1.一種檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，包括：1)校準品；2)R1試劑；3)R2試劑；4)R3試劑；

所述R1試劑的主要成分為磁珠包被CMV抗原；

所述R2試劑的主要成分為吖啶酯標記的抗人IgG抗體；

所述R3試劑為項目稀釋液。

2.根據權利要求1所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述R1試劑儲存于pH為6.0-8.0的含有蛋白穩定劑的磷酸鹽緩沖液中，其濃度為0.03％-0.5％；所述R2試劑儲存于pH為6.0-8.0的檸檬酸緩沖溶液中，其質量濃度為0.1-0.5μg/mL；所述R3試劑為含有0.5％-3％蛋白的pH為6.0-8.0的檸檬酸緩沖液。

3.根據權利要求2所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述R1試劑緩沖液為含有0.05％吐溫和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸鹽緩沖液；所述R2試劑緩沖液為含有0.05％吐溫和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM檸檬酸緩沖液；所述R3試劑緩沖液為含有0.5％-3％蛋白、0.05％吐溫和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM檸檬酸緩沖液。

4.根據權利要求1所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述磁珠包被CMV抗原中CMV抗原與磁珠的包被質量比為0.5％-3％。

5.根據權利要求1所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，吖啶酯標記的抗人IgG抗體中抗人IgG抗體與吖啶酯的摩爾比1:3-1:15。

6.根據權利要求1所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，還包括兩點企業校準品，校準品中含有巨細胞病毒IgG抗體的濃度分別為30U/mL和100U/mL。

7.根據權利要求6所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述校準品的緩沖液為含有20％小牛血清的100mM PBS緩沖液。

8.一種權利要求3所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備R1試劑：

充分混勻磁珠后，置于離心管中，集磁，去上清，加入封閉劑，充分混勻后再次集磁，去上清，重復封閉3次，再次加入封閉劑，充分混勻，加入包被用CMV抗原，使用360°旋轉混勻儀室溫旋轉混勻孵育后，集磁，去上清，加入清洗緩沖液，混勻，集磁，去上清，重復清洗3次，得到磁珠包被CMV抗原；用含有0.05％吐溫和0.05％Proclin300、pH6.0-8.0的100mM磷酸鹽緩沖液配制成磁珠濃度為0.03％-0.5％的固相R1試劑；

S2、制備R2試劑：

將抗人IgG抗體加入50mM-200mM PBS緩沖溶液，將抗人IgG抗體與吖啶酯混合，充分混勻；室溫放置2-4小時后，加入賴氨酸封閉液，混勻，封閉；封閉后對吖啶酯標記抗體溶液進行純化，收取純化后溶液，得到吖啶酯標記的抗人IgG抗體；用含有0.05％吐溫和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM檸檬酸緩沖液稀釋至終濃度為0.1-0.5μg/mL的R2試劑；

S3、制備R3試劑：

用0.05％吐溫和0.05％Proclin300，pH6.0-8.0的100mM的檸檬酸緩沖液配制含有0.5％-3％蛋白的R3試劑；

S4、配制校準品

用含有20％小牛血清的100mM PBS緩沖液將巨細胞病毒IgG抗體稀釋成不同濃度的校準品；

S5、分裝校準品、R1試劑、R2試劑和R3試劑，組裝成成品。

9.根據權利要求8所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒的制備方法，其特征在于，步驟S2中純化步驟采用的是AKTA蛋白純化儀。

10.根據權利要求1-7任意一項所述的檢測巨細胞病毒IgG抗體化學發光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的檢測步驟為：將待測樣本與R1試劑和R3試劑孵育18min，洗滌，加入R2試劑再孵育5min，洗滌，加入激發液記錄相對發光強度；在一定范圍內，樣本中巨細胞病毒IgG抗體的含量與相對發光強度成正比。