[發(fā)明專利]白藜蘆醇的用途及原始卵泡的體外激活試劑與方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811092101.0
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN110923198A
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏國良;王超;張拓;何美娜;杜新華;趙立華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿;趙青朵

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及白藜蘆醇的用途及原始卵泡的體外激活試劑與方法。本發(fā)明以白藜蘆醇處理卵巢皮質(zhì)區(qū)組織，同時激活A(yù)KT和mTOR兩個信號通路關(guān)鍵蛋白，對SIRT1水平也存在促進作用。卵巢皮質(zhì)區(qū)組織在含白藜蘆醇的激活培養(yǎng)液中培養(yǎng)，可體外喚醒休眠的原始卵泡，之后便可進行手術(shù)移植。白蘆藜醇是一種葡萄酒等人類食物中富含的天然物質(zhì)，其對機體的毒副作用未見報道，故用于IVA的可行性和安全性值得肯定甚至優(yōu)于現(xiàn)有IVA藥物；并且，白蘆藜醇能夠提高應(yīng)用于原始卵泡IVA的效率，即體外激活時間縮短至三十分鐘，且患者只需單次手術(shù)，從而大大降低了患者的痛苦和手術(shù)費用等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及白藜蘆醇的用途及原始卵泡的體外激活試劑與方法。

背景技術(shù)

在雌性哺乳動物中，卵泡是卵巢的基本功能單元，哺乳動物的卵泡是由位于卵泡中心的、被阻滯在第一次減數(shù)分裂前期的卵母細胞、包裹在其周圍的顆粒細胞及最外層的膜細胞構(gòu)成。哺乳動物在出生前后其原始卵泡庫即建立完成。此后，原始卵泡數(shù)目不會再增加，且隨著年齡的增加會周期性地減少，因此原始卵泡是一個不可再生資源。

原始卵泡庫建立之后，每次只有不到5％原始卵泡能夠被激活并進入生長卵泡階段，而卵巢中的絕大部分原始卵泡仍處于休眠狀態(tài)。原始卵泡激活之后，進一步經(jīng)歷初級卵泡、次級卵泡、腔前卵泡、有腔卵泡和排卵前卵泡階段最終排卵，或者在發(fā)育過程中閉鎖。在人類，最后一組原始卵泡大約在50歲左右被激活。目前，人們尚不清楚為什么一些原始卵泡能啟動生長，而其鄰近的卵泡卻能保持靜止的原因。目前有關(guān)原始卵泡細胞中激素受體未見報道，故原始卵泡的起始募集可能不受內(nèi)分泌激素的調(diào)控，而受卵巢自身分泌的旁分泌因子調(diào)控。目前認為自分泌、旁分泌因素以及卵母細胞和前顆粒細胞之間相互作用參與調(diào)節(jié)原始卵泡的生長啟動。

原始卵泡的激活包括顆粒細胞的生長分化和卵母細胞的生長兩部分。原始卵泡的激活是前體顆粒細胞和卵母細胞之間精密協(xié)調(diào)互作的過程。研究表明：原始卵泡的激活起始于前體顆粒細胞，當激活前體顆粒細胞mTOR后，可促進其胞內(nèi)KitL蛋白的表達，KitL分泌到胞外后與卵母細胞膜上的受體Kit結(jié)合，繼而激活卵母細胞內(nèi)的PI3K信號通路，最終促進了原始卵泡的激活。已有研究證明，卵母細胞中存在的PTEN-PI3K-AKT-FOXO3A和TSC1/TSC2-mTOR兩條信號通路在原始卵泡激活過程中均發(fā)揮重要作用。

近年來，以目前已知的原始卵泡激活機制中的重要蛋白為靶標，人們已將其應(yīng)用于相關(guān)的臨床治療。目前，將卵巢皮質(zhì)區(qū)原始卵泡在體外用相應(yīng)藥物處理后，喚醒休眠的原始卵泡，被稱為原始卵泡體外激活(in vitro activation primordial follicle,IVA)。將體外激活的原始卵泡移植回體內(nèi)，待其發(fā)育成熟后，取出卵母細胞，經(jīng)體外受精之后再將胚胎移植回母體，即能夠促使胚胎正常發(fā)育，最終得到出生后健康發(fā)育的嬰兒。這種治療方法為因各種原因?qū)е侣殉苍缢?如提前做過卵巢冷凍的臨床癌癥治療患者)實現(xiàn)生育提供了可能。目前已公開的關(guān)于原始卵泡IVA的技術(shù)主要是利用AKT、mTOR激動劑或者是兩種激動劑聯(lián)合使用，在體外處理卵巢皮質(zhì)組織，促進原始卵泡激活，其缺點是均需要一種或兩種藥物，并且體外組織處理時間需要24小時，這就造成患者需要經(jīng)歷兩次手術(shù)才能完成原始卵泡的IVA過程。

白藜蘆醇(Resveratrol)化學(xué)名稱為(E)-3，5，4-三羥基二苯乙烯，是一種多酚類化合物，又稱為芪三酚。近年來的研究表明白藜蘆醇具有廣泛的生物活性，但目前尚未見關(guān)于白藜蘆醇對原始卵泡體外激活的作用。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供白藜蘆醇的用途及原始卵泡的體外激活試劑與方法，經(jīng)驗證，白藜蘆醇作為原始卵泡的體外激動劑，激活時間短，安全性更高。

白藜蘆醇在制備mTOR激動劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了白藜蘆醇在制備卵巢中mTOR激動劑中的應(yīng)用。