[發明專利]手性巰基化合物拆分新型質譜衍生化試劑

在審

• 申請號: 201811085934.4
• 申請日: 2018-09-18
• 公開（公告）號: CN108956823A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 閔俊哲;馬慶坤;許春燕
• 申請（專利權）人: 延邊大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 延邊科友專利商標代理有限公司 22104
• 代理人: 柳明哲

本發明涉及手性巰基化合物拆分新型質譜衍生化試劑，具體指(R)?(5?(3?isothiocyanatopyrrolidin?1?yl)?5?oxopentyl)triphenylphosphonium(NCS?OTPP)試劑。該試劑含有帶正電荷三苯基膦(triphenylphosphonium)及異硫氰酸酯結構，可對巰基官能團手性化合物進行靶標衍生化，利用液相色譜?質譜（LC?MS）技術，建立巰基官能團手性化合物拆分高靈敏、高選擇性的分析方法。另外，因本試劑本身帶有三苯基膦結構強紫外基團也可在紫外（UV）檢測器中能顯著提高檢測靈敏度，并且衍生化形成的巰基官能團手性化合物非對映體可在反相色譜中進行手性拆分。為巰基官能團手性代謝物的拆分研究及各種疾病手性生物標志物的篩選提供新型高靈敏度手性質譜衍生化試劑。

技術領域

本發明涉及生物分析領域的含巰基官能團手性代謝物分析，特別是指一種手性巰基化合物拆分新型質譜衍生化試劑。

背景技術

生物體內巰基化合物是構成蛋白質的主要物質，在人體生理活動中起著至關重要的作用，不僅參與細胞的氧化還原平衡和細胞生長，還可以表征細胞內氧化還原狀態以及蛋白質的高級有序結構。細胞內巰基化合物的水平與人體的許多疾病有關。如半胱氨酸水平異常與兒童生長緩慢、毛發色素脫失、水腫、肝損害、皮膚病變等密切相關；高半胱氨酸水平異常是導致心血管疾病與阿爾茨海默病的一個重要因素，也與神經管畸形、妊娠并發癥、骨質疏松癥有關；谷胱甘肽與許多細胞反應過程有關，包括細胞內的氧化還原平衡、外源性物質的代謝與維持、細胞內信號傳導、基因調控等。異常的谷胱甘肽水平會導致癌癥、不正常的衰老、心臟疾病的發生。而生物巰基化合物大多含有一個或者多個手性中心，巰基化合物的一對手性對映體在體內的生物活性有時會有顯著的差異。因此設計開發能夠選擇性檢測手性巰基化合物的質譜手性衍生化試劑具有重要的生物學和臨床意義。

目前檢測巰基化合物的方法主要有高效液相色譜法（HPLC），毛細管電泳，分光光度法，伏安法，質譜（MS）法。其中分光度法和伏安法因檢測靈敏度低，操作復雜，結果重現性差等原因難以讓人接受。而最近，熒光光譜法因具有靈敏度高、選擇性強、快速簡便等優點已成為研究熱點，用于檢測巰基化合物的熒光探針也發展迅速，各種探針不斷涌現，例如：熒光碳點，熒光素類，香豆素類，羅丹明類，苯的衍生物類，吡唑啉基類等。然而，大多數用于檢測巰基化合物的探針都會受到一些限制，如發射波長短（低于500 nm），熒光變化很小，檢出限高，響應時間長等問題。另外，能否選擇合適的熒光基團和識別基團是構建熒光探針的關鍵，而在激發波長與發射波長處是否表現出優異的熒光穩定性則是構建熒光探針的必要條件。液相-質譜（LC-MS）法由于其高靈敏度和特異性已成為代謝物分析的有利工具，另外其操作簡便，分析速度快，重現性好等優點廣為大眾所接受。然而，相對于熒光手性衍生化試劑，質譜手性衍生化試劑還處于發展中的階段。現如今，利用熒光分析手段進行鑒別不同巰基化合物的文獻相對較多，而以LC-MS進行拆分手性巰基化合物的相關報道則少之又少。鑒于此，開發一種基于LC-MS拆分手性巰基化合的新型質譜衍生化試劑是十分必要的。

發明內容

本發明的目的是為了拆分手性巰基化合物，提供一種巰基官能團手性化合物的手性拆分用高靈敏度、高選擇性質譜衍生化試劑。

本發明的技術方案為：

一種手性巰基化合物拆分新型質譜衍生化試劑，以4-羧丁基三苯基溴化膦（TPP）和手性氨基吡咯烷（PR-Boc-N）, N-羥基琥珀酰亞胺(N-hydroxysuccinimide, NHS)起始物，與二氯硫化碳（CSCl₂）為反應合成 (R)-(5-(3-

isothiocyanatopyrrolidin-1-yl)-5-oxopentyl)triphenylphosphonium(NCS-OTPP)。該NCS-OTPP的具體結構式如下：