[發明專利]一種白細胞膜修飾的紫杉醇靶向緩釋脂質體及其制備方法

有效

• 申請號: 201811085461.8
• 申請日: 2018-09-18
• 公開（公告）號: CN109381429B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 劉紅;陳勇;秦吟;王俏
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K31/337;A61K47/34;A61K47/46;A61P35/00
• 代理公司: 武漢帥丞知識產權代理有限公司 42220
• 代理人: 朱必武;周瑾

1.一種白細胞膜修飾的紫杉醇靶向緩釋脂質體，其特征在于：所述脂質體由紫杉醇、星型膽酸功能化聚乳酸、大豆磷脂、膽固醇所構成的載藥緩釋脂質體及在其表面修飾的白細胞膜組成。

2.如權利要求1所述的一種白細胞膜修飾的紫杉醇靶向緩釋脂質體，其特征在于：所述脂質體中各組分的質量百分比為：紫杉醇5-10％、大豆磷脂50-70％、膽固醇15-25％、星型膽酸功能化聚乳酸6-12%、白細胞膜2-6%。

3.一種白細胞膜修飾的紫杉醇靶向緩釋脂質體的制備方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

（1）紫杉醇緩釋脂質體的制備：稱取紫杉醇、大豆磷脂、膽固醇和星型膽酸功能化聚乳酸，溶于氯仿中，于35～40 ℃下減壓旋轉蒸發除去溶劑，直至形成脂質體薄膜，置真空干燥器中24 h，加入磷酸緩沖液于40 ℃恒溫水浴旋轉水化1 h，冰浴探頭超聲4～6 min，最后通過微射流高壓均質機處理，過微孔濾膜，得到紫杉醇緩釋脂質體混懸液；

（2）白細胞膜的制備：①分離白細胞：選取大鼠并通過眼窩收集全血，用等量的 EDTA-PBS緩沖液稀釋，加入至離心管中，備用；取9% 聚蔗糖和 15.2% 泛影葡胺混合，用蒸餾水配制成比重為 1.114g/ml 的溶液，用0.3%氯化鈉溶液調節滲透壓至540 mOsm/L，沿管壁加入至上述離心管中,以700×g的離心力離心30min，用移液槍緩慢吸取中間的乳白色云霧狀層，用EDTA- PBS緩沖液清洗, 離心，收集白細胞；

②白細胞膜的分離與純化：收集的白細胞用白細胞低滲裂解液重新懸浮，用勻漿機冰浴均質2 min，4 ℃下低滲裂解24 h，以1200×g的離心力離心10min，棄去上清液，將收集的白細胞膜分別用30%、45%、50%三個濃度的梯度蔗糖溶液于4 ℃下以24000×g的離心力離心30 min，收集純化的白細胞膜，置于2～6 ℃冰箱中備用；

（3）白細胞膜對紫杉醇緩釋脂質體的修飾：將制備好的白細胞膜與脂質體振蕩混合，孵育融合12 h，離心，用PBS緩沖液洗滌，然后用蒸餾水重新混懸，使用超聲波儀以35 kHz的頻率和80 W的功率，超聲60 s，過微孔濾膜，高速離心，棄去上清液，冷凍干燥，即得白細胞膜修飾的紫杉醇靶向緩釋脂質體。

4.如權利要求3所述的一種白細胞膜修飾的紫杉醇靶向緩釋脂質體的制備方法，其特征在于：步驟（1）微射流高壓均質機處理時，均質壓力為120 MPa，均質溫度為37 ℃，均質次數為5次。