[發(fā)明專利]一種細胞培養(yǎng)用人造細胞膜覆層微載體及其制備方法

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• 申請日: 2018-09-16
• 公開（公告）號: CN109055294A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝同;張建軍
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州怡彼得生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C08F220/18;C08F230/02
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本發(fā)明提供了一種細胞培養(yǎng)用人造細胞膜覆層微載體及其制備方法。本發(fā)明的微載體以魔芋葡甘聚糖微球為基質(zhì)，用生物仿生新材料人造細胞膜覆層微球。本發(fā)明的微載體的制備方法如下：將基質(zhì)微球分別用石油醚和無水乙醇洗滌后，烘干備用；將2?甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿(MPC)與甲基丙烯酸正丁酯溶解于乙醇，在引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN)的作用下聚合成為人造細胞膜材料，將其稀釋到2%濃度后備用；將洗滌好的魔芋葡甘聚糖微球加入到人造細胞膜乙醇溶液中浸泡后，在真空下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀干燥后即得微載體產(chǎn)品。該微載體表面人造細胞膜材料覆蓋均勻，連接牢固，具有無毒性、細胞貼壁好、可降解、細胞容易洗脫不粘連等優(yōu)點，且制成的微載體成本低廉，生產(chǎn)過程簡單，周期較短，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物材料的組織工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種細胞培養(yǎng)用人造細胞膜覆層微載體及其制備方法。

背景技術(shù)

微載體培養(yǎng)技術(shù)是目前公認的最有發(fā)展前途的一種用于動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的技術(shù)。1967 年Van Wezel 首次將微載體用于動物細胞培養(yǎng)以來，微載體培養(yǎng)技術(shù)已發(fā)展成為目前貼壁依賴性細胞規(guī)模化培養(yǎng)的主要方法。微載體具有比表面積大、培養(yǎng)基利用率高和細胞收集過程簡單等優(yōu)點，廣泛用于多種細胞的培養(yǎng)和疫苗、抗體、核酸等生物制品的生產(chǎn)，并在組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有一定的應(yīng)用前景。至今國際市場上出售的微載體商品類型已達十幾種，其中常用的商品化微載體有三種:Cytodex1,2,3,Cytopore和Cytoline，目前最常使用的是Cytodexl,2,3型微載體。

魔芋葡甘聚糖( KGM) 是一種天然高分子多糖，具有良好的生物相容性和無毒性等， KGM 微球透明度高，機械性能好且密度適宜是一種潛在的微載體基質(zhì)，目前國內(nèi)研究報道比較多，眾多文獻和專利對合成方法進行了介紹，如：CN201210523380.8，但將KGM 微球進行表面改性用于動物細胞培養(yǎng)鮮有報道。

二十世紀末，日本油脂株式會社（NOF CORPORATION.）在開發(fā)的仿生材料系列產(chǎn)品（LIPIDURE）方向上走在了世界前列，他們開發(fā)的這類醫(yī)學(xué)仿生材料由于其極高的保濕透氣性能和與人體細胞膜極其相似的成分及特性，被譽為人造細胞膜。

這種高端醫(yī)學(xué)仿生材料具有高度的生物相容性，研究表明使用LIPIDURE涂覆產(chǎn)品可防止細胞線粘附在基材表面，同時可防止蛋白質(zhì)被吸附到基材表面，使浮游培養(yǎng)成為可能。人造細胞膜已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域和醫(yī)療器械領(lǐng)域，并且已經(jīng)商品化：用于制造血液透析膜治療尿毒癥患者；涂于生物支架(scaffold)材料用于擴張血管；做成仿細胞膜聚合物膠束緩釋藥物提高療效；應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域的芯片表面減少對于蛋白質(zhì)、DNA、細胞等的非特異性吸附；涂覆于人造關(guān)節(jié)材料表面減少其與軟組織間的界面摩擦問題，增加壽命；涂覆于人造血管內(nèi)壁減少血小板的聚集，減少血栓風(fēng)險；用作軟性隱形眼鏡材料；高檔化妝品的保濕原料。

由以上綜述可見KGM 微球是一種優(yōu)良的微載體基質(zhì)，人造細胞膜LIPIDURE是很好的微載體涂覆材料，將兩者的優(yōu)勢結(jié)合在一起，這種人造細胞膜覆層微載體在細胞培養(yǎng)上的有著潛在的巨大優(yōu)勢，給我們在這一領(lǐng)域探索提供了廣闊空間。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種細胞培養(yǎng)用人造細胞膜覆層微載體及其制備方法，該微載體表面人造細胞膜材料覆蓋均勻，連接牢固，具有無毒性、細胞貼壁好、可降解、細胞容易洗脫不粘連等優(yōu)點，且制成的微載體成本低廉，生產(chǎn)過程簡單，周期較短，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。

為達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：

一種細胞培養(yǎng)用人造細胞膜覆層微載體的其制備方法，包括如下步驟，

1）將魔芋葡甘聚糖微球加入到石油醚中，攪拌洗滌，過濾后再加入到乙醇中，攪拌洗滌，過濾烘干后備用；