[發(fā)明專利]一種降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌的復(fù)壯方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811075251.0
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109082399B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐杰;許修宏;劉華晶;李洪濤
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/36
• 分類號: C12N1/36;C12N1/20;C12N1/02;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 田鴻儒

本發(fā)明屬于環(huán)境微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及到菌株的復(fù)壯，特別涉及到一種降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌的復(fù)壯方法。采用堆肥樣品作為培養(yǎng)基質(zhì)進行馴化培養(yǎng)，經(jīng)過多次平皿涂布、平皿劃線傳代培養(yǎng)以及氨氧化能力檢測，最終得出最適合此株氨氧化細(xì)菌恢復(fù)氨氧化能力的復(fù)壯條件。用此方法復(fù)壯后的降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌氨氧化活性可恢復(fù)至退化前正常水平。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于環(huán)境微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及到菌株的復(fù)壯，特別涉及到一株降低畜禽糞便堆肥高溫期氨揮發(fā)的高溫異養(yǎng)氨氧化細(xì)菌的復(fù)壯方法。

背景技術(shù)

堆肥是一種有效利用畜禽廢棄物的方法，它既可以將糞便無害化處理，又可以將糞便中的養(yǎng)分和有機質(zhì)循環(huán)利用到耕地中。目前，堆肥已經(jīng)成為處理有機固體廢物最有效的方法之一。然而，畜禽糞便高溫堆肥過程中以NH₃揮發(fā)為主的氮素?fù)p失嚴(yán)重，研究結(jié)果表明堆肥過程中氨揮發(fā)造成的氮素?fù)p失可達總量的一半以上，這不僅減少了堆肥中的氮素含量，而且污染大氣、危害人畜健康、腐蝕設(shè)備以及帶來酸雨危害和水體富營養(yǎng)化。

氨氧化細(xì)菌可以將NH₃氧化成NO^2-，從而降低氮素?fù)p失，降低難聞氣味，減少環(huán)境污染，是畜禽糞便堆肥中的理想保氮微生物。目前已報道的絕大多數(shù)氨氧化細(xì)菌均為中溫自養(yǎng)好氧菌，它們只能在堆肥降溫期發(fā)揮作用。然而，NH₃的揮發(fā)主要發(fā)生在堆肥的高溫期，在此階段的釋放量可占到總揮發(fā)量的70％左右，所以對于高溫氨氧化細(xì)菌的研究更有實踐意義。

通常氨氧化細(xì)菌經(jīng)過一定時間的培養(yǎng)，由于反復(fù)迭代而出現(xiàn)特定活性退化，或由于菌種保藏不當(dāng)而出現(xiàn)功能降低現(xiàn)象，需要對其進行復(fù)壯，以維持其生長活性和氨氧化功能的穩(wěn)定性。由于氨氧化細(xì)菌自身具有生長速率低、世代周期長、其培養(yǎng)物易受異養(yǎng)菌感染而不易分離純化等原因，目前為止獲得的氨氧化細(xì)菌純培養(yǎng)種類極少。因此，對于氨氧化細(xì)菌、尤其是高溫異養(yǎng)氨氧化細(xì)菌的菌種復(fù)壯技術(shù)還鮮有報道，且現(xiàn)有菌種復(fù)壯方法不適合用作降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌的復(fù)壯或復(fù)壯效果不好。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有高溫異養(yǎng)氨氧化細(xì)菌復(fù)壯技術(shù)鮮有報道，且現(xiàn)有菌種復(fù)壯方法不適合用作降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌的復(fù)壯或復(fù)壯效果不好的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種降低畜禽糞便堆肥高溫期氨揮發(fā)的高溫異養(yǎng)氨氧化細(xì)菌的復(fù)壯方法，以為畜禽糞便堆肥的保氮處理提供持續(xù)的微生物源。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌的復(fù)壯方法，步驟為：

(1)將需要復(fù)壯的降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌進行馴化培養(yǎng)：

將待復(fù)壯的降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌接種于氨氧化細(xì)菌種子培養(yǎng)基，50℃、100rpm培養(yǎng)，培養(yǎng)到濃度為D₆₀₀＝0.1～0.15得到種子液，種子液按體積比種子液：復(fù)壯馴化培養(yǎng)基為1：10接入復(fù)壯馴化培養(yǎng)基中，50℃、100rpm條件下恒溫振蕩培養(yǎng)到濃度為D₆₀₀＝0.1～0.15后，取上清菌液按體積比上清菌液：氨氧化細(xì)菌檢測培養(yǎng)基為1：10接入氨氧化細(xì)菌檢測培養(yǎng)基，50℃、100rpm條件下恒溫振蕩培養(yǎng)3天。利用格里斯試劑顯色法進行氨氧化能力檢測。

所述降低畜禽糞便堆肥氨揮發(fā)的高溫微好氧堆肥保氮菌即為Nitrobacillusharbinensis BM62。保藏機構(gòu)為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，分類命名為Nitrobacillus harbinensis，保藏編號為CGMCC No.16237，保藏日期為2018年8月13日。

格里斯試劑配制方法及檢測結(jié)果說明：

格里斯試劑配制方法如下：

對氨基苯磺酸溶液(A液)：稱取4g對氨基苯磺酸溶于700mL水和300mL冰乙酸中，混勻置于棕色瓶，室溫保存。