[發明專利]一種發酵生產巴弗洛霉素A1的方法

有效

• 申請號: 201811072287.3
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109321612B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 周劍;江紅
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C12P17/16
• 分類號: C12P17/16;C12N1/20;C12R1/465
• 代理公司: 北京東方芊悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11591
• 代理人: 彭秀麗

1.一種發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，包括將發酵菌株接種于適宜發酵培養基中進行發酵培養的步驟；

所述發酵菌株為灰棕褐鏈霉菌，其分類命名為Streptomyces griseobrunneus FIM-Ba150115，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.15241，保藏日期為2018年1月18日。

2.根據權利要求1所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述發酵培養基包括如下質量含量的組分：可溶性淀粉3.0-4.0％、蛋白胨1.5-3％、酵母粉1-2％、玉米漿干粉0.5-1.5％、碳酸鈣0.2-0.3％，調pH值7.0-7.5。

3.根據權利要求2所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述發酵培養基還包括0.025-0.3％的前體物。

4.根據權利要求3所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述前體物選自異丁醇、異丁酸、醋酸銨、異亮氨酸、亮氨酸和/或纈氨酸。

5.根據權利要求1-4中任一項權利要求所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述發酵培養的條件包括：控制轉速200-400rpm，通氣量0.08-1.2vvm，于25-30℃進行發酵培養。

6.根據權利要求5所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，還包括將所述的灰棕褐鏈霉菌接種于種子培養基中進行種子液培養的步驟，所述種子培養基包括如下質量含量的組分：可溶性淀粉2.0％、蛋白胨2.0％、酵母粉1.0％、碳酸鈣0.2％，調pH值7.2。

7.根據權利要求6所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，還包括將所述的灰棕褐鏈霉菌接種于ISP2斜面培養基中進行保存的步驟，所述ISP2斜面培養基包括如下質量含量的組分：葡萄糖0.4％、 麥芽提取物1.0％、酵母提取物0.4％、瓊脂1.8％，調pH值7.2。

8.根據權利要求7所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，還包括將發酵液中bafliomycins A1進行提純的步驟。

9.根據權利要求8所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述提純步驟包括：

(1)發酵結束后，取發酵液加入95％的乙醇進行浸泡，離心并棄菌渣，收集乙醇浸泡清液以0.5BV/h的速度上樣于HP20大孔吸附樹脂柱進行吸附，然后分別用6倍柱體積的水，和40％乙醇-水溶液來進行洗脫，洗脫流速為1BV/h，以除去部分雜質色素；隨后用4倍柱體積的95％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，濃縮得到膏狀粗提物；

(2)取膏狀粗提物加入少量甲醇超聲溶解，后與G200-300目硅膠充分攪拌混勻，并真空干燥去除溶劑；并將伴有粗品的硅膠填裝到G200-300目硅膠柱上層，然后分別用石油醚：乙酸乙酯＝8：1、石油醚：乙酸乙酯＝4：1、石油醚：乙酸乙酯＝2：1作為流動相進行梯度洗脫，分段收集洗脫液；

(3)將收集的洗脫液采用HPLC檢測有效組分，合并相同組分后真空減壓濃縮，收集濃縮液溶于DMSO后上樣于DAC動態軸向壓縮系統，經HPLC檢測后合并目標產物，真空干燥后，得bafliomycins A1化合物純品。

10.根據權利要求9所述的發酵生產bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述DAC動態軸向壓縮系統，填料為C18，流動相為70％乙腈-水溶液，控制流速10ml/min，檢測波長247nm。