[發(fā)明專利]細胞凍存液、凍存復蘇方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811072202.1
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109221082B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設計）人: 鄢和新;楊秋蕊;翟志敏
• 申請（專利權）人: 上海慧存醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/00;C12N5/0775
• 代理公司: 上海恒銳佳知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31286
• 代理人: 黃海霞

1.一種細胞凍存液，其特征在于，應用于間充質(zhì)干細胞和免疫細胞的凍存，所述細胞凍存液由酰基化ε-多聚賴氨酸、多元醇、平衡緩沖液和葡萄糖組成；

所述多元醇為甘油，所述酰基化ε-多聚賴氨酸為丁二酸酐酰基化ε-多聚賴氨酸；

所述平衡液緩沖溶液包含可溶性鈉鹽、可溶性鉀鹽、可溶性鎂鹽、可溶性鈣鹽、滲透壓穩(wěn)定劑、還原劑、氨基酸和活性代謝中間產(chǎn)物；

所述酰基化ε-多聚賴氨酸的質(zhì)量濃度為10~200mg/mL，所述多元醇的體積占所述細胞凍存液體積的百分比為1%~20%，所述葡萄糖的含量為2-40mM，余量為所述平衡緩沖液；

所述平衡緩沖液中，所述可溶性鈉鹽含量為10~120mM、所述可溶性鉀鹽含量為10~120mM、所述可溶性鎂鹽含量為5~15mM，所述可溶性鈣鹽含量為0.1~1mM，所述滲透壓穩(wěn)定劑含量為0.01~40mM，所述還原劑含量為0.002~5mM，所述氨基酸含量為15~50mM，所述活性代謝中間產(chǎn)物的含量為1~10mM；

所述滲透壓穩(wěn)定劑為甘露糖醇，所述還原劑為維生素C、谷胱甘肽、N-乙酰-L-半胱氨酸和叔丁基對苯二酚，所述氨基酸為組氨酸和谷氨酸，所述活性代謝中間產(chǎn)物為α-酮戊二酸和腺苷。

2.根據(jù)權利要求1所述的細胞凍存液，其特征在于，所述酰基化ε-多聚賴氨酸的質(zhì)量濃度為80~130mg/mL，所述多元醇的體積占所述細胞凍存液體積的百分比為10%~20%。

3.根據(jù)權利要求1所述的細胞凍存液，其特征在于，所述維生素C含量為0.5~2mM，所述N-乙酰-L-半胱氨酸含量為1~5mM，所述叔丁基對苯二酚含量為2~5μM。

4.根據(jù)權利要求1所述的細胞凍存液，其特征在于，所述組氨酸含量為20~50mM，所述谷氨酸含量為15~30mM。

5.根據(jù)權利要求1所述的細胞凍存液，其特征在于，所述平衡緩沖液組分還包括人血清白蛋白，所述平衡緩沖液中，所述人血清白蛋白的質(zhì)量濃度為2~20mg/mL。

6.根據(jù)權利要求1所述的細胞凍存液，其特征在于，所述平衡緩沖液的pH為7.0~7.6。

7.一種細胞凍存復蘇方法，其特征在于，包含以下步驟：

S1:取待凍存細胞懸液，離心收集細胞，利用權利要求1~6任一項所述的細胞凍存液對離心收集到的所述細胞進行重懸并調(diào)整所述細胞的濃度，獲得細胞懸液；

S2:吸取所述細胞懸液分裝于凍存管或凍存袋中，然后將所述凍存管或凍存袋凍存；

S3:取出所述凍存管或凍存袋，在30-40℃的條件下對所述凍存管或凍存袋進行解凍處理，得到復蘇后的細胞。

8.根據(jù)權利要求7所述的細胞凍存復蘇方法，其特征在于，在所述步驟S2中，將所述凍存管或凍存袋置于-82℃~-78℃中凍存。

9.根據(jù)權利要求8所述的細胞凍存復蘇方法，其特征在于，將所述凍存管或凍存袋置于-82℃~-78℃中凍存至少3小時后移入液氮中凍存。

10.根據(jù)權利要求9所述的細胞凍存復蘇方法，其特征在于，所述細胞懸液的濃度為1×10⁶~100×10⁶個/mL。

11.根據(jù)權利要求7所述的細胞凍存復蘇方法，其特征在于，在所述步驟S2中，每個所述凍存管中裝入0.2~1mL所述細胞懸液。

12.根據(jù)權利要求7所述的細胞凍存復蘇方法，其特征在于，在所述步驟S2中，每個所述凍存袋中裝入10~50mL所述細胞懸液。

13.一種如權利要求7~12任意一項所述的細胞凍存復蘇方法在凍存干細胞中的應用。

14.一種如權利要求7~12任意一項所述的細胞凍存復蘇方法在凍存免疫細胞中的應用。