[發(fā)明專利]一種基于動(dòng)物半乳凝集素-3糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域富集糖蛋白的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811067280.2
• 申請(qǐng)日: 2018-09-13
• 公開（公告）號(hào): CN109111489B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 應(yīng)萬濤;錢小紅;張勇;王明超;趙洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院;北京蛋白質(zhì)組研究中心
• 主分類號(hào): C07H1/00
• 分類號(hào): C07H1/00;C07H3/02;C07K14/47;C12N15/12;C12N15/63
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;魏少偉

本發(fā)明公開了一種基于動(dòng)物半乳凝集素?3糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域富集糖蛋白的方法。本發(fā)明利用的半乳凝集素?3糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域來源于動(dòng)物為如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列1的第37?176位的蛋白質(zhì)；A2)將序列表中序列1的第37?176位所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質(zhì)；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)。本發(fā)明利用半乳凝集素?3糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域及其四聚制備的凝集素親和柱可以成功富集糖蛋白。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中，一種基于動(dòng)物半乳凝集素-3糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域富集糖蛋白的方法。

背景技術(shù)

半乳凝集素(Galectins)是凝集素中一類進(jìn)化上十分保守的可溶性蛋白質(zhì)，含有一個(gè)或兩個(gè)長約130個(gè)氨基酸組成的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域(carbohydrate recognition domain，CRD)，對(duì)β-半乳糖苷及其綴合物具有特異親和力。迄今為止，已有15個(gè)哺乳動(dòng)物半乳凝集素家族成員被發(fā)現(xiàn)，根據(jù)其CRD的組成數(shù)目可分為含有單一CRD的原型，含有兩個(gè)CRD的串聯(lián)重復(fù)型，含有一個(gè)CRD和一個(gè)膠原蛋白樣重復(fù)結(jié)構(gòu)域的嵌合型。其中，半乳凝集素-3是嵌合型中的唯一成員，普遍存在于動(dòng)物界，通過非經(jīng)典途徑分泌，在無配體情況下也能保持活性，要求還原性環(huán)境。半乳凝集素-3在人類基因組中由單個(gè)基因編碼，位于14號(hào)染色體q21-22位點(diǎn)，在人體主要由激活的巨噬細(xì)胞分泌，可與細(xì)胞內(nèi)糖蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞表面分子相互作用，參與細(xì)胞黏附、增殖、活化、凋亡等生物學(xué)過程。

目前商業(yè)途徑獲得的凝集素大多都是植物凝集素，例如對(duì)高甘露糖具有特異親和力的伴刀豆凝集素(ConA)，對(duì)N-乙酰葡萄糖氨及唾液酸具有特異親和力的麥胚凝集素(WGA)，對(duì)半乳糖具有特異親和力的蓖麻凝集素(RCA120)等。目前，植物凝集素富集方法在線蟲、鼠肝、血清、尿液等復(fù)雜樣品糖蛋白組學(xué)研究中已成功應(yīng)用，但很少有動(dòng)物凝集素被用于糖蛋白/糖肽富集的相關(guān)報(bào)道，可能是由于其成本高，重組表達(dá)困難，不易保存，親和力低等原因。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何富集糖蛋白。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了凝集素或其聚合物在下述X1)-X4)任一種中的應(yīng)用：

X1)在富集β-半乳糖或其綴合物中的應(yīng)用；

X2)在制備富集β-半乳糖或其綴合物產(chǎn)品中的應(yīng)用；

X3)在檢測β-半乳糖或其綴合物中的應(yīng)用；

X4)在制備檢測β-半乳糖或其綴合物產(chǎn)品中的應(yīng)用；

所述凝集素為m1)或m2)：

m1)動(dòng)物半乳凝集素；

m2)所述動(dòng)物半乳凝集素的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域。

上述應(yīng)用中，所述動(dòng)物可為a1)或a2)：

a1)哺乳動(dòng)物；

a2)人。

所述凝集素可為半乳凝集素-3。

所述凝集素的聚合物可為所述動(dòng)物半乳凝集素的四聚體。

上述應(yīng)用中，所述動(dòng)物半乳凝集素的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域可為如下A1)、A2)或A3)：

A1)氨基酸序列是序列1的第37-176位的蛋白質(zhì)；

A2)將序列表中序列1的第37-176位所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質(zhì)；

A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)；

所述糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域的聚合物可為如下B1)、B2)或B3)：