[發(fā)明專利]一種可以同時(shí)對多種DNA標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒溶液實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量或濃度校正的試劑盒和應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2018-09-12
• 公開（公告）號: CN109207566A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙國棟
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)昆山創(chuàng)新中心
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 南京縱橫知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 薛海霞;董建林

1.一種可以同時(shí)對多種DNA標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒溶液實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量或濃度校正的試劑盒，其特征在于，包括與質(zhì)粒載體中的若干通用序列單元互補(bǔ)配對的特異性正向引物、特異性反向引物和特異性探針；所述的若干通用序列單元為AmpR、KanR、lacZ、ori、Neomycin、Tetracycline、多克隆位點(diǎn)、啟動(dòng)子的一種或幾種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可以同時(shí)對多種DNA標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒溶液實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量或濃度校正的試劑盒，其特征在于，包括：

a.與質(zhì)粒載體中的通用序列單元互補(bǔ)配對的特異性正向引物，其中

(1)SEQ ID NO.1-8中的任意一個(gè)序列，為AmpR的正向引物；

(2)SEQ ID NO.9-17中的任意一個(gè)序列，為KanR的正向引物；

(3)SEQ ID NO.18-20中的任意一個(gè)序列，為lacZ的正向引物；

(4)SEQ ID NO.21-28中的任意一個(gè)序列，為ori序列的正向引物；

b.與質(zhì)粒載體中的通用序列單元互補(bǔ)配對的特異性反向引物，其中

(1)SEQ ID NO.29-36中的任意一個(gè)序列，為AmpR的反向引物；

(2)SEQ ID NO.37-45中的任意一個(gè)序列，為KanR的反向引物；

(3)SEQ ID NO.46-48中的任意一個(gè)序列，為lacZ的反向引物；

(4)SEQ ID NO.49-56中的任意一個(gè)序列，為ori序列的反向引物；

c.與質(zhì)粒載體中的通用序列單元互補(bǔ)配對的特異性探針，其中

(1)SEQ ID NO.57-64中的任意一個(gè)序列，為AmpR的探針；

(2)SEQ ID NO.65-73中的任意一個(gè)序列，為KanR的探針；

(3)SEQ ID NO.74-76中的任意一個(gè)序列，為lacZ的探針；

(4)SEQ ID NO.77-84中的任意一個(gè)序列，為ori序列的探針；

(5)所述的特異性探針5’端的熒光基團(tuán)可以是但不限于FAM、JOE、VIC、HEX、ROX、CY5、TAMRA等可以用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)的熒光基團(tuán)；

(6)所述的特異性探針3’端的淬滅基團(tuán)可以是但不限于Dabcyl、BHQ1、BHQ2、IowaBlack等任何能夠淬滅相應(yīng)熒光基團(tuán)的淬滅基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可以同時(shí)對多種DNA標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒溶液實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量或濃度校正的試劑盒，其特征在于，還包括無Mg²⁺離子PCR緩沖液、Mg²⁺、4種dNTP混合液、熱啟動(dòng)聚合酶。

4.一種可以同時(shí)對多種DNA標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒溶液實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量或濃度校正的PCR反應(yīng)混合液，其特征在于，反應(yīng)混合液配方為

。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種可以同時(shí)對多種DNA標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒溶液實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量或濃度校正的PCR反應(yīng)混合液，其特征在于，特異性正向引物、特異性反向引物和特異性探針的組合物與質(zhì)粒載體中的若干通用序列單元互補(bǔ)配對，所述的若干通用序列單元為AmpR、KanR、lacZ、ori、Neomycin、Tetracycline、多克隆位點(diǎn)、啟動(dòng)子的一種或幾種。