[發明專利]一種抗HER2多克隆抗體

在審

• 申請號: 201811060497.0
• 申請日: 2018-09-12
• 公開（公告）號: CN109134656A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 張茂祥;章文;裴毓;章登吉;武勇
• 申請（專利權）人: 四川妙和生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/32
• 分類號: C07K16/32;C07K1/22;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

本發明公開了一種抗HER2的多克隆抗體,所述多克隆抗體通過如下方法制備得到：(1)制備得到HER2抗體，并進行純化；(2)將前述的HER2抗體作為抗原對動物進行多次免疫，收集動物每次被免疫后的血清樣本，(3)將所述各個血清樣本進行ELISA效價檢測，(4)選擇效價大于1:2000K數值的血清樣本，進行收集，并進行初步純化，(5)將初步純化的血清樣本，進一步進行親和柱層析純化。本發明的抗Her2多克隆抗體，不僅具有高特異性、高靈敏度，且具有較高的效價，給Her2抗體的檢測提供了很好的優質抗體。

技術領域

本發明涉及免疫生物技術領域，具體涉及一種抗Her2抗體及其制備方法。

背景技術

乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一。全世界每年新增100萬以上的乳腺癌病例，而且每年近40萬人死于乳腺癌。近年來，乳腺癌的發病率在世界范圍內呈明顯的上升趨勢。乳腺癌通常的治療手段有手術治療、放化療和內分泌治療等等，這些常規治療手段雖然在很大程度上延長了病人生存期，然而它們副作用很大，其療效難以進一步提高。腫瘤靶向治療是近年來興起的一種新的腫瘤治療方式，其中具有代表性的是抗腫瘤單克隆抗體。

HER2受體(human epidermal growth factor receptor2人表皮生長因子受體II,)是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，由922個腺嘌呤、1,382個胞嘧啶、1,346個鳥嘌呤和880個胸腺嘧啶組成。分子量約為185KD。抗HER2單克隆抗體可以特異性地和HER2分子結合，其抗腫瘤機制包括以下幾點:特異結合于HER2受體胞外段從而阻斷HER2同源二聚體的組成性激活并干擾HER2與其家族其它成員形成異源二聚體。介導HER2受體的內吞和在溶酶體中的降解；活化PTEN(與tensin同源的磷酸酯酶)阻斷PI3K(磷酸肌醇3-激酶)信號通路；調節細胞周期而抑制腫瘤細胞增殖；促進腫瘤細胞凋亡；抗腫瘤血管生成；ADCC(抗體依賴細胞介導的細胞毒性作用)作用；抑制DNA修復；增加化療藥物的細胞毒性；逆轉腫瘤細胞對宿主細胞因子殺傷作用的抵抗等。

HER2受體蛋白一般在胎兒時期表達，成年后會在極少數組織低表達。根據目前研究表明，30％以上的人類腫瘤中存在HER2基因的擴增/過度表達(如乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、輸卵管癌、胃癌和前列腺癌等)；其中20％－30％的原發性浸潤性乳腺癌有HER2基因的擴增/過度表達。有研究表明HER2的過度表達與腫瘤的發生和侵襲有關，可提高轉移的危險。HER2過度表達的乳腺癌患者病情進展迅速，化療緩解期短，內分泌治療效果差，無病生存和總生存率低。則以HER2為靶點的治療性單抗以其高特異性、定向性、安全性和低風險成為了針對Her2陽性乳腺癌的有效治療方法。而在歐美發達等國家對于重組單抗技術的封鎖和壟斷，造成進口藥物的價格昂貴。這就使得國內患者可選擇者性單一或者支付不起。根據調查研究表明，大多數乳腺癌死亡病例(69％)發生在發展中國家。

目前針對HER2引起疾病的疫苗、特異性治療藥物等防控手段尚在研制中。HER2的抗原含量檢測、保護性表位研究、治療性單克隆抗體的制備，具有廣泛的應用范圍和社會需求。高質量的HER2單克隆抗體(mAb)有可能用于研制治療性mAb、HER2患者血清學診斷以及HER2的抗原含量的檢測，因此具有重要的應用價值。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種用于檢測HER2抗體的方法，并提供一種抗HER2的多克隆抗體。

為解決上述技術問題，本發明提供一種抗HER2的多克隆抗體,所述多克隆抗體通過如下方法制備得到：

(1)制備得到HER2抗體，并進行純化；

(2)將前述的HER2抗體作為抗原對動物進行多次免疫，收集動物每次被免疫后的血清樣本，

(3)將所述各個血清樣本進行ELISA效價檢測，

(4)選擇效價大于1:2000K數值的血清樣本，進行收集，并進行初步純化，