[發明專利]一種從兔糞中分離雙歧桿菌及其純化方法

在審

• 申請號: 201811056559.0
• 申請日: 2018-09-11
• 公開（公告）號: CN109136145A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 徐雙貴;胡培;盧文軒
• 申請（專利權）人: 安徽萬士生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12R1/01
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種從兔糞中分離雙歧桿菌及其純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：制備樣品液；取新鮮兔糞置于蛋白胨緩沖液中，充分攪拌均勻，一次離心處理后收集上層濁液；向上濁液加入適量蛋白胨緩沖液，再次離心處理后收集上層濁液，即為樣品液；

步驟二：稀釋樣品液；取一定量樣品液以十倍稀釋法使用蛋白胨緩沖液進行稀釋，稀釋梯度為10^-1至10^-9；

步驟三：分離培養；分別取一定量的稀釋梯度為10^-4至10^-9的稀釋樣品液置于培養基平板上，每個稀釋梯度的稀釋樣品液做2至3個平行樣；厭氧條件下培養45-50小時后在移至好氧條件下培養5-7小時；

步驟四：制備純化培養基；對改良MRS培養基進行氮源和碳源優化；

步驟五：純化培養；根據雙歧桿菌性狀對步驟三中的培養的菌落進行挑選，將挑選的菌種接種至步驟四制備的純化培養液中進行純化培養。

2.根據權利要求1所述的一種從兔糞中分離雙歧桿菌及其純化方法，其特征在于，所述步驟一中兔糞質量與蛋白胨緩沖液體積比為1:10。

3.根據權利要求1所述的一種從兔糞中分離雙歧桿菌及其純化方法，其特征在于，所述步驟三中培養溫度為36-39攝氏度。

4.根據權利要求1所述的一種從兔糞中分離雙歧桿菌及其純化方法，其特征在于，所述步驟四中氮源為：大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白水解物和牛肉浸膏；碳源為：葡萄糖、異麥芽糖和乳糖。

5.根據權利要求4所述的一種從兔糞中分離雙歧桿菌及其純化方法，其特征在于，所述大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白水解物和牛肉浸膏質量比依次為2:1:1:1；所述葡萄糖、異麥芽糖和乳糖質量比依次為2:1:1。

6.根據權利要求1所述的一種從兔糞中分離雙歧桿菌及其純化方法，其特征在于，所述步驟五中培養條件為在溫度為37-39攝氏度厭氧條件下培養10-16小時。