[發明專利]一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法

在審

• 申請號: 201811052109.4
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109136235A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 開國銀;周偉;黃芬芬;陸孫杰;時敏;鄧昌平
• 申請（專利權）人: 浙江中醫藥大學;上海師范大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

1.一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，在丹參中過表達SmMYB2。

2.根據權利要求1所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

采用基因克隆的方法從丹參中克隆獲得SmMYB2基因；

構建SmMYB2的亞細胞定位載體；

構建植物過表達載體pCAMBIA2300⁺-SmMYB2及抑制表達載體pCAMBIA2300⁺-SmMYB2-SRDX；

將所得的植物表達載體pCAMBIA2300⁺-SmMYB2及pCAMBIA2300⁺-SmMYB2-SRDX轉化發根農桿菌，獲得用于轉化丹參的發根農桿菌菌株；

利用所構建的發根農桿菌菌株遺傳轉化丹參外植體，獲得經PCR檢測為陽性的轉基因毛狀根克隆；

經PCR檢測為陽性的轉基因毛狀根克隆中，轉SmMYB2基因提高丹參中丹酚酸及花青素含量。

3.根據權利要求1或2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，所述SmMYB2基因序列為SEQ ID NO.1所示的DNA序列。

4.根據權利要求2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，構建SmMYB2的亞細胞定位載體所用載體為pMON530。

5.根據權利要求2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，構建植物過表達載體pCAMBIA2300⁺-SmMYB2所使用的植物表達載體為經過改造獲得的pCAMBIA2300⁺載體，包含CaMV35S啟動子和NOS終止子、多克隆位點、復制起始點及卡那霉素抗性位點。

6.根據權利要求2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，所述發根農桿菌為C58C1菌株。

7.根據權利要求2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，所述PCR檢測方法如下：

設計發根位點基因rolB的特異引物，進行PCR擴增；

設計插入基因SmMYB2及NOS終止子上、下游特異性引物，進行DNA擴增；

瓊脂糖凝膠電泳下檢測，出現目的條帶則為陽性克隆。

8.根據權利要求1或2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，所述SmMYB2促進丹酚酸生物合成途徑中的關鍵酶基因SmPAL11,SmC4H,Sm4CL11,SmTAT,SmHPPR11,SmRAS,SmCYP98A14的表達。

9.根據權利要求1或2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，SmMYB2激活SmCYP98A14的啟動子。

10.根據權利要求1或2所述一種轉SmMYB2基因同時提高丹參中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，SmMYB2與上游蛋白SmbHLH1發生互作。