[發明專利]一種包含CASP8凋亡蛋白的病毒樣顆粒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811050707.8
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109234242B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 敖竹君;姚小劍;陳偉;殷立華;薛亮;劉振勇
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院珠海校區
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 溫旭

本發明公開了一種包含CASP8凋亡蛋白的病毒樣顆粒及其制備方法和應用，屬于基因工程蛋白質技術領域。該包含CASP8凋亡蛋白的病毒樣顆粒是由pSVCMV?Gag?CASP8質粒、包裝質粒pCMV?Δ8.2和VSV?G質粒共轉染到細胞后包裝釋放、純化濃縮獲得；所述pSVCMV?Gag?CASP8質粒是由全長CASP8蛋白融合到HIV?1Gag(Pr55)的C?末端構建而成。本發明的制備方法制備過程簡便，易純化，結構均一，經本方法制得的包含CASP8凋亡蛋白的病毒樣顆粒具有很強的誘導腫瘤細胞死亡，并能夠有效抑制腫瘤細胞生長的治療效果。

技術領域

本發明涉及基因工程蛋白質技術領域，具體涉及一種包含CASP8凋亡蛋白的病毒樣顆粒及其制備方法和應用。

背景技術

乳腺癌是全世界最常見的癌癥，是女性癌癥相關死亡的第五大常見原因。在過去的二十年中，除了細胞毒性化療外，乳腺癌的藥物治療已經演變為一種更有針對性的方法，極大地改善了患者的預后。然而，轉移性乳腺癌（MBC）仍然無法治愈，估計5年總生存率僅為23%。乳腺癌治療的一個重要而出人意料的發現是耐藥性癌細胞的出現。因此，為了進一步改善乳腺癌患者的臨床結果和存活率，仍然需要開發新的潛在治療策略。

細胞凋亡是一種自然發生的過程，通過該過程細胞被導向程序性細胞死亡，這是一個允許多細胞生物維持組織完整性和功能并消除受損或不需要的細胞的關鍵機制。細胞凋亡失調是癌癥發展和進展中的關鍵過程，即癌細胞避免凋亡并繼續增殖的能力是癌癥發展的基本步驟之一。一些致癌突變破壞細胞凋亡，導致腫瘤的發生、發展或轉移；另一方面，幾種腫瘤抑制基因的沉默可能導致腫瘤形成和進展的風險增加。細胞凋亡是通過兩種主要的信號傳導機制觸發的：“內在”和“外在”途徑，在兩種途徑中，信號傳導導致Cys（半胱氨酸）蛋白酶家族激活或半胱天冬酶激活CASP8-11種人類半胱氨酸蛋白酶中的一種，是細胞凋亡過程的中心，與所有其他半胱氨酸蛋白酶一樣，CASP8作為無活性的單鏈多肽鏈酶原胱天蛋白酶合成，并通過蛋白水解切割活化，多聚體復合體（Fas相關的死亡結構域（FADD））或其他半胱天冬酶的反式切割，然后活化的CASP8激活下游的半胱天冬酶3和7，使細胞凋亡，因此，CASP8是一種有效的促凋亡分子。一些研究表明，由于啟動子甲基化，乳腺癌細胞（MCF-7，MB231，SKBR3和HCC1937）中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶caspase 8（CASP8）和maspin表達降低。因此，細胞凋亡是癌癥遺傳學和癌癥治療之間的生物學聯系，并且控制凋亡的基因和蛋白質可能是潛在的藥物靶標。 CASP8在導致細胞凋亡的酶促級聯的繁殖中起著至關重要的作用：研究表明腺病毒介導的基因（Adv-casp-8）轉移強烈誘導了U251人膠質瘤細胞的凋亡并抑制了U251異種移植物的體內生長。這項研究還表明，通過Adv-CASP 8載體引入CASP8 CASP8ye同樣能增強細胞凋亡并抑制人胃癌細胞的腹膜播散。因此，CASP8顯示出抗乳腺癌的潛力。

病毒樣顆粒（Virus-like particle, VLP）是病毒復制過程中自然產生或通過基因工程表達病毒結構蛋白并自行組裝出的不含病毒核酸的顆粒樣物質，除核酸外其結構與來源病毒基本一致，VLP與完整感染性病毒具有相似的大小和構象，并具有與病毒最接近的抗原結構和免疫學特性，能有效刺激機體產生體液免疫和細胞免疫應答。病毒樣顆粒具有眾多優點：1.不具有感染性及核酸整合致病性，相對滅活減毒疫苗其安全性得到了保障；2.VLPs保持了病毒蛋白空間結構，可通過和病毒感染相似的途徑將抗原呈遞給免疫細胞，有效誘導機體免疫系統產生免疫保護應答；3.VLPs易規模化生產，可滿足臨床應用需要。此外，VLPs也可以用作傳遞外源基因和小分子的有效載體。即使在沒有其他病毒蛋白的情況下表達，HIV結構蛋白Gag（組特異性抗原）也可以有效形成VLP。因此，病毒樣顆粒的出現為研發更為安全有效的疫苗提供了一個新的契機。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種包含CASP8凋亡蛋白的病毒樣顆粒及其制備方法和應用，該方法制備過程簡便，易純化，結構均一，經本方法制得的包含CASP8凋亡蛋白的病毒樣顆粒具有良好的治療效果，能夠很好地誘導細胞死亡，有效抑制腫瘤生長。