[發明專利]一種人工合成的MAR共有序列、表達載體、表達系統及其應用

有效

• 申請號: 201811050422.4
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109097357B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 王天云;郭瀟;田政偉;賈巖龍;王芳;宋超;王小引
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/85;C12P21/00
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發明涉及一種人工合成的MAR共有序列、表達載體、表達系統及其應用，屬于生物技術領域。本發明的人工合成的MAR共有序列，由Humanβ?globin MAR、Human MAR X?29、Human MAR 1?68、Human TOP1 MAR、Human HPRT MAR、Human MAR?7、CHO MAR?6、Human CSP?B MAR、CHO DHFR intron MAR、Chicken lysozyme MAR、Human MAR?2、Humanβ?interferon MAR、Human MAR?3中的至少兩種的基序連接而成。本發明提供的人工合成的MAR共有序列的串聯MAR序列可以提高CHO細胞中外源蛋白的表達量，能實現重組蛋白在宿主細胞中的高效表達。

技術領域

本發明涉及一種人工合成的MAR共有序列、表達載體、表達系統及其應用，屬于生物技術領域。

背景技術

隨著基因工程技術的發展，利用基因工程生產的重組蛋白質的數量和種類不斷的增加，并已經成為醫藥工業的重要部分。哺乳動物細胞由于具備類似于人類細胞的翻譯后加工修飾(post-translational modifications，PTMs)的功能，因此，哺乳動物細胞表達系統是目前藥物重組蛋白生產的重要平臺。中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)細胞表達系統是目前應用最為廣泛的一類動物細胞表達系統，其中近70％的藥物蛋白(如抗體)是采用CHO細胞生產的。但是CHO細胞表達系統也存在重組蛋白表達水平低、高產穩定細胞篩選周期長、細胞培養成本高等缺陷，這嚴重制約著重組蛋白藥物的生產。影響重組蛋白在CHO細胞中表達的因素眾多，表達載體就是其中一個重要因素。此外，在CHO細胞表達系統中，高水平持續穩定表達的細胞株往往難以得到，這是因為轉基因轉染細胞后的隨機整合，使有些轉基因發生沉默或者表達水平降低，因此需要從大量細胞克隆株中分離出穩定高效表達的克隆細胞株，這也給基因工程產業化生產帶來了很大困擾。

核基質結合區序列(matrix attachment region，MAR)是限制酶消化后仍附著在核基質上的DNA序列。研究表明，MAR序列能提高CHO表達系統中轉基因表達水平，同時降低轉化株轉基因表達水平差異。然而，目前為止，雖有關于MAR提高轉基因表達的報道，申請公布號為CN 106520832A的中國發明專利申請公開了一種雙順反子表達載體、表達系統、制備方法及應用；申請公布號為CN 104975009A的中國發明專利申請公開了一種新型的含MAR核心片段的動物細胞表達載體。但兩項公開的中國發明專利申請中MAR序列來源于天然的MAR序列，缺乏對有功能MAR序列的特征和共有序列分析，一方面導致常用的MAR元件較大，增加了載體構建的難度，另外質粒的轉染效率會隨著載體大小的增加而降低，從而限制了MAR元件在哺乳動物細胞表達系統中的應用。此外，由于缺乏對有功能MAR序列的分析，導致MAR元件中沒有功能或者有副作用的元件存在，導致MAR的功能減弱或者增強作用被抵消。

發明內容

本發明的目的是提供一種人工合成的MAR共有序列。該共有序列可增強哺乳動物表達系統轉基因的表達，實現重組蛋白在宿主細胞的高表達。

本發明還提供上述人工合成的MAR共有序列在提高哺乳動物表達系統中重組蛋白表達水平方面的應用。

另外，本發明提供含上述人工合成的MAR共有序列的表達載體。

本發明還提供上述表達載體在表達重組蛋白方面的應用。

本發明還提供含上述表達載體的表達系統。

最后，本發明提供上述表達系統在表達重組蛋白方面的應用。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：